一、 背景

刺五加在中国医药学中做为药物广泛应用已有悠久的历史，具有“补中益精、坚筋骨、强志意”的作用，久服“轻身耐老”，与它药配伍亦可“进饮食、健气力、不忘事”。刺五加胶囊具有益气健脾，补肾安神的功效，用于脾肾阳虚，体虚乏力，食欲不振，腰膝酸痛，失眠多梦。

二、 原理

刺五加胶囊内容物经50 %甲醇溶液超声波辅助提取后，采用梯度洗脱条件，用紫外-可见光检测器检测，其特征图谱应呈现9个特征峰。

三、 试剂与材料

3.1水：符合GB/T 6682的一级水；

3.2甲醇：色谱纯；

3.3乙腈：色谱纯；

3.4磷酸：色谱纯；

3.5 50 %甲醇溶液：分别移取50 mL甲醇（3.2）和50 mL水（3.1），混匀，备用；

3.6 30 %乙腈溶液：分别移取300 mL乙腈（3.3）和700 mL水（3.1），混匀，备用；

3.7 0.2 %磷酸水溶液：取2 mL磷酸（3.4）于1000 mL容量瓶中，加水（3.1）溶解并定容至刻度，混匀，备用；

3.8 紫丁香苷对照品：CAS号为118-34-3，纯度为99.90 %；

3.9 刺五加胶囊：市售，去胶囊壳，取内容物。

四、 仪器与设备

4.1高效液相色谱仪：K2025 P2二元高压输液泵、K2025 AS自动进样器、K2025 CO柱温箱、K2025 UVD紫外-可见光检测器、Wookinglab色谱工作站；

4.2分析天平：精确到0.0001 g；

4.3涡旋振荡器；

4.4超声波清洗机；

4.5一次性针头注射器；

4.6 0.22 μm有机针式过滤器；

4.7移液器：100 μL，1000 μL；

4.8容量瓶：10 mL、1000 mL，棕色带刻度；

4.9具塞锥形瓶。

五、 测定步骤

5.1 参照物溶液的制备

取紫丁香苷对照品（3.8）适量，精密称定，加50 %甲醇（3.5）制成每1 mL含45 μg的溶液，即得参照物溶液。

5.2 供试品溶液的制备

取刺五加胶囊内容物（3.9）适量，研细，取约0.8 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入50 %甲醇（3.5）25 mL，密塞，称定重量，超声（功率250 W，频率50 kHz）处理30分钟，放冷，再称定重量，用50 %甲醇（3.5）补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

5.3 色谱条件

a）色谱柱：ChromCore AQ C₁₈，4.6×250mm，5μm或者相当的色谱柱；

b）流动相：以30 %乙腈溶液（3.6）为流动相A，0.2 %磷酸水溶液（3.7）为流动相B；按下表进行梯度洗脱：

c）流速：0.8 mL/min；

d）进样量：10 μL；

e）洗针液：50 %甲醇溶液（3.5）；

f）柱温：20 ℃；

g）检测器及检测波长：检测器为紫外-可见光检测器，检测波长为220 nm。

六、 结果

按照上述色谱条件（5.3）进行采集，参照物溶液（5.1）的色谱图如图1所示，积分结果如表1所示。

 

图1 参照物溶液的色谱图

表1 参照物溶液色谱图积分结果

由表1中数据可知，紫丁香苷峰的理论塔板数为125860，满足《刺五加胶囊国家药品标准拟修订草案》（公示稿）中理论塔板数按紫丁香苷峰计算应不低于6000的要求；紫丁香苷峰的拖尾因子为0.89，具有良好的峰形。

供试品溶液（5.2）的色谱图如图2所示，积分结果见表2，相对保留时间偏差结果见表3。

 

 

图2 供试品溶液的色谱图

（峰2为原儿茶酸，峰4（S）为紫丁香苷，

峰5为绿原酸，峰7为刺五加苷E，峰8为异嗪皮啶）

表2 供试品溶液色谱图积分结果表

表3相对保留时间偏差结果表

由图2和表2~表3中数据可知，供试品溶液特征图谱中呈现9个特征峰，其中与紫丁香苷参照物峰相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，相对保留时间与规定值的偏差范围为-4.06 %~4.01 %，满足《刺五加胶囊国家药品标准拟修订草案》（公示稿）中其相对保留时间均在规定值的±5%范围之内的要求。

七、 结论

本文使用悟空K2025高效液相色谱仪测定刺五加胶囊的特征图谱。本实验以30 %乙腈溶液和0.2 %磷酸水溶液作为流动相，采用梯度洗脱条件，实验结果表明：紫丁香苷峰的理论塔板数为125860，满足《刺五加胶囊国家药品标准拟修订草案》（公示稿）中理论塔板数按紫丁香苷峰计算应不低于6000的要求；紫丁香苷峰的拖尾因子为0.89，具有良好的峰形；供试品溶液特征图谱中呈现9个特征峰，其中与紫丁香苷参照物峰相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，相对保留时间与规定值的偏差范围为-4.06 %~4.01 %，满足《刺五加胶囊国家药品标准拟修订草案》（公示稿）中其相对保留时间均在规定值的±5%范围之内的要求。因此，使用悟空K2025高效液相色谱仪测定刺五加胶囊的特征图谱，峰形良好，分离度优异，且相对保留时间的偏差完全满足《刺五加胶囊国家药品标准拟修订草案》（公示稿）中的要求。

附1：仪器配置清单

附2：悟空Wooking  K2025高效液相色谱仪（可靠、精准、友好、合规）

 

 报告人：张佳佳

联系方式：18810812920