一、背景

吲达帕胺化学名为N-（2-甲基-2，3-二氢-1H-吲哚-1-基）-3-氨磺酰基-4-氯-苯甲酰胺，为白色或类白色结晶性粉末；无臭；在三氯甲烷中易溶，在丙酮或二氧六环中略溶，在乙醇或乙醚中微溶，在水中不溶。吲达帕胺为磺胺类利尿剂，具有利尿和钙拮抗作用，是一种强效、长效的降压药。

二、实验过程

1原理

吲达帕胺及其有关物质在240nm处有紫外吸收，使用高效液相色谱法测定。

2试剂与材料

2.1 水：符合GB/T 6682的一级水；

2.2 甲醇：色谱纯；

2.3 冰醋酸：色谱纯；

2.4 流动相：准确量取甲醇（2.2）450mL、水（2.1）550mL和冰醋酸（2.3）1mL，混匀，超声后备用；

2.5 氢氧化钠：分析纯；

2.6 1mol/L氢氧化钠溶液：称取氢氧化钠（2.5）4.0g，加入少量水（2.1）溶解，放冷后用水（2.1）定容至100mL，混匀，备用；

2.7 浓盐酸：分析纯；

2.8 1mol/L 盐酸溶液：量取11mL水（2.1），加入1mL浓盐酸（2.7），混匀，备用；

2.9 吲达帕胺对照品。                                                                       

3 仪器与设备

3.1高效液相色谱仪：K2025 P2二元高压输液泵、K2025 AS自动进样器、K2025 CO柱温箱、K2025 UVD紫外-可见光检测器、K2025 DAD二极管阵列检测器、Wookinglab色谱工作站；

3.2分析天平：精确到0.0001g；

3.3涡旋振荡器；

3.4超声波清洗机；

3.5容量瓶：50mL、100mL、1000mL，棕色带刻度；

3.6抽滤装置：带真空泵；

3.7 抽滤滤膜：0.45μm，水系；

3.8移液器：100μL，1000μL。

4 测定步骤

4.1 溶液配制

4.1.1 系统适用性溶液的配制

准确称取吲达帕胺对照品（2.9）20mg，加入甲醇（2.2）5mL溶解，用流动相（2.4）稀释至100mL，摇匀。取5mL，加1mol/L氢氧化钠溶液（2.6）2mL，摇匀，置于水浴锅中加热1小时（沸水浴），放冷，加入1mol/L盐酸溶液（2.8）调节至中性，用流动相（2.4）稀释至50mL，摇匀。

4.1.2 供试品溶液的配制

准确称取吲达帕胺对照品（2.9）5mg，加入流动相（2.4）10mL溶解，混匀，配制成每1mL中含有0.5mg的溶液。

4.1.3 对照溶液的配制

精密量取供试品溶液（4.1.2）1mL，置于100mL容量瓶中，用流动相（2.4）稀释至刻度，混匀，配制成每1mL中含有5μg的溶液。

4.1.4 灵敏度溶液的配制

精密量取对照溶液（4.1.3）1mL，置于50mL容量瓶中，用流动相（2.4）稀释至刻度，混匀。

4.2色谱条件

a）色谱柱：C18色谱柱，4.6×250mm，5μm或者相当的色谱柱；

b）流动相：详见2.4；

c）流速：1.0mL/min；

d）进样量：20μL；

e）洗针液：甲醇-水=90：10；

f）柱温：40℃；

g）检测器及检测波长：紫外-可见光检测器和二极管阵列检测器，检测波长均为240nm；

h）采集时间：记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍。

5 系统适用性要求及限度

系统适用性溶液色谱图中，吲达帕胺峰的保留时间约为12min，吲达帕胺峰与相对保留时间约为1.26的降解产物峰之间的分离度应大于6.0。

限度：供试品溶液色谱图中如有杂质峰，单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0.5倍（0.5%），各杂质峰面积的和不得大于对照溶液的主峰面积（1.0%），小于对照溶液主峰面积0.02倍的色谱峰忽略不计。

6 实验结果

6.1系统适用性溶液色谱图

按照上述色谱条件（4.2）进行采集，系统适用性溶液的色谱图如图1所示，积分结果如表1所示。

 

图1系统适用性溶液的色谱图

表1系统适用性溶液色谱图积分结果

由表1中数据可知，吲达帕胺的保留时间为12.500min，吲达帕胺降解产物的保留时间为15.650min，两者的相对保留时间为1.25，满足《中国药典（2020年版）》二部中对吲达帕胺峰保留时间的要求；吲达帕胺降解产物与吲达帕胺峰之间的分离度为7.10，满足《中国药典（2020年版）》二部中吲达帕胺降解产物与吲达帕胺峰之间的分离度应大于6.0的要求。

6.2供试品溶液色谱图

供试品溶液的色谱图如图2所示，积分结果见表2。

 

图2供试品溶液的色谱图

表2 供试品溶液色谱图积分结果

由表2中数据可知，吲达帕胺降解产物的峰面积为20.007mAU.s，最大单杂的峰面积为12.964mAU.s，均小于对照溶液主峰面积的0.5倍（155.384mAU.s）；总杂峰面积为32.971mAU.s，小于对照溶液主峰面积（310.767mAU.s），满足《中国药典（2020年版）》二部中对吲达帕胺限度的要求。

6.3对照溶液色谱图

对照溶液的色谱图如图3所示，积分结果见表3。

 

图3对照溶液的色谱图

表3 对照溶液色谱图积分结果

将对照溶液连续进样7针，叠加的色谱图如图4所示，结果见表4。

 

图4对照溶液连续进样7针叠加的色谱图

表4对照溶液连续进样7针重复性数据统计

由表4中数据可知，对照溶液连续进样7针重复性测试，吲达帕胺保留时间的RSD为0.102%，峰面积的RSD为0.296%，具有良好的定性定量重复性。

6.4光谱图

使用二极管阵列检测器，对吲达帕胺对照溶液（4.1.3）进行分析，吲达帕胺的紫外光谱图如图5所示。

 

图5 吲达帕胺的光谱图

由图5可知，吲达帕胺的特征吸收波长为203nm和241nm。

6.5灵敏度溶液色谱图

按照色谱条件（4.2），对灵敏度溶液（4.1.4）进行分析，其色谱图如图6所示，灵敏度计算结果见表5。

 

图6 灵敏度溶液的色谱图

表5吲达帕胺灵敏度计算结果

由表5中数据可知，吲达帕胺灵敏度溶液的信噪比S/N为24.6。

三、结论

本文使用悟空K2025高效液相色谱仪测定吲达帕胺及其有关物质。实验结果表明：吲达帕胺的保留时间为12.500min，吲达帕胺降解产物的保留时间为15.650min，两者的相对保留时间为1.25，满足《中国药典（2020年版）》二部中对吲达帕胺峰保留时间的要求；吲达帕胺降解产物与吲达帕胺峰之间的分离度为7.10，满足《中国药典（2020年版）》二部中吲达帕胺降解产物与吲达帕胺峰之间的分离度应大于6.0的要求；吲达帕胺降解产物的峰面积为20.007mAU.s，最大单杂的峰面积为12.964mAU.s，均小于对照溶液主峰面积的0.5倍；总杂峰面积为32.971mAU.s，小于对照溶液主峰面积，满足《中国药典（2020年版）》二部中对吲达帕胺限度的要求；对照溶液连续进样7针重复性测试中，吲达帕胺保留时间的RSD为0.102%，峰面积的RSD为0.296%，具有良好的定性定量重复性；吲达帕胺的特征吸收波长为203nm和241nm；吲达帕胺灵敏度溶液的信噪比S/N为24.6。因此，悟空 K2025高效液相色谱仪满足《中国药典（2020年版）》二部中吲达帕胺有关物质测定的需求。

附1：仪器配置清单