舒巴坦钠有关物质的测定 高效液相色谱法
2024-02-04
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一、摘要

本文使用悟空K2025高效液相色谱仪测定舒巴坦钠的有关物质。色谱条件:C18色谱柱(4.6×250mm5μm),流速为1.0mL/min,柱温为40℃,进样量为20μL,检测波长为215nm。实验结果:舒巴坦峰的保留时间为6.167min,2-氨基-3-甲基-3-亚磺基丁酸峰与6-氨基青霉烷酸峰之间的分离度23.316-氨基青霉烷酸峰与舒巴坦峰间的分离度7.27对照溶液连续进样7针重复性测试中,舒巴坦峰保留时间的RSD为0.096%,峰面积的RSD为0.487%;灵敏度溶液的信噪比S/N为446.1,均满足《中国药典(2020年版)》的要求。

二、背景

舒巴坦钠,与青霉素类头孢菌素类联合,用于治疗敏感菌所致的尿路感染肺部感染支气管感染耳鼻喉科感染、腹腔和盆腔感染、胆道感染败血症皮肤软组织感染等。。

本品为白色或类白色结晶性粉末;微有特臭。本品在水中易溶,在甲醇中略溶,在乙醇中极微溶解,在丙酮或乙酸乙酯中几乎不溶。

三、实验过程

1 范围

适用于舒巴坦钠有关物质的测定。

2原理

舒巴坦钠及有关物质在215nm处有紫外吸收,使用高效液相色谱法测定。

3 试剂与材料

3.1水:符合GB/T6682的一级水;

3.2 乙腈:色谱纯;

3.3 磷酸二氢钾:分析纯;

3.4磷酸:色谱纯;

3.5 1mol/L磷酸溶液:称取磷酸12.2g,加水定容至100mL;

3.6 5.44g/L磷酸二氢钾溶液(流动相A):称取磷酸二氢钾(3.35.44g,用水定容至1L,用1mol/L磷酸溶液调节pH值至4.0;

3.7 氢氧化钠:分析纯;

3.8 1mol/L氢氧化钠溶液:称取氢氧化钠(3.7)0.4g,加水定容至10mL;

3.9 盐酸:分析纯;

3.10 0.1mol/L盐酸溶液:吸取盐酸(3.9)90μL,加水定容至10mL;

3.11 舒巴坦钠对照品;

3.12 6-氨基青霉烷酸对照品;

3.13 6-氨基青霉烷酸溶液:称取6-氨基青霉烷酸对照品(3.12)15mg,加水定容至50mL;

3.14 舒巴坦钠试验用样品。                                                                      

4 仪器与设备

4.1高效液相色谱仪:K2025 P2二元高压输液泵、K2025 AS自动进样器、K2025 CO柱温箱、K2025 UVD紫外-可见光检测器、Wookinglab色谱工作站;

4.2分析天平:精确到0.0001g;

4.3涡旋振荡器;

4.4容量瓶:10mL、100mL,棕色带刻度。

5 测定步骤

5.1 溶液配制

系统适用性溶液  取舒巴坦钠对照品(3.11)20mg,置50ml量瓶中,加2mL及0.1mol/L氢氧化钠溶液(3.8)0.5mL使溶解,室温放置10分钟,加0.1mol/L盐酸溶液(3.10)0.5mL及6-氨基青霉烷酸溶液(3.13)用流动相(5.44g/L磷酸二氢钾溶液(3.6):乙腈(3.2)=98:2)稀释至刻度,摇匀;

供试品溶液  取本品适量,加流动相A(3.6)溶解并稀释制成每1ml中约含2.5mg的溶液;

对照溶液  精密量取供试品溶液适量,用流动相A(3.6)定量稀释制成每1ml中约含2.5μg的溶液;

灵敏度溶液  供试品溶液用流动相A(3.6)稀释2000倍。

5.2色谱条件

a)色谱柱:C18色谱柱,4.6×250mm,5μm或者相当的色谱柱;

b)流动相:流动相A 为5.44g/L磷酸二氢钾溶液(3.6),流动相B为乙腈,按下表进行梯度洗脱


c)流速:1.0mL/min;

d)柱温:40℃;

e)检测器及波长:紫外检测器,检测波长为215nm;

f)进样量:20μL。

6 系统适用性要求

系统适用性溶液色谱图中,2-氨基-3-甲基-3-亚磺基丁酸、6-氨基青霉烷酸及舒巴坦依次出峰,舒巴坦峰的保留时间约为5~6分钟,2-氨基-3-甲基-3-亚磺基丁酸峰与6-氨基青霉烷酸峰之间的分离度应大于4.0,6-氨基青霉烷酸峰与舒巴坦峰间的分离度应大于6.0。

7 实验结果

按照上述色谱条件(5.2)进行采集,系统适用性溶液的色谱图如图1所示,积分结果如表1所示。

 

1系统适用性溶液的色谱图

表1系统适用性溶液色谱图积分结果


由表1中数据可知,舒巴坦峰的保留时间为6.167min,2-氨基-3-甲基-3-亚磺基丁酸峰与6-氨基青霉烷酸峰之间的分离度23.316-氨基青霉烷酸峰与舒巴坦峰间的分离度7.27,满足《中国药典(2020年版)》中规定的舒巴坦峰的保留时间约为5~6分钟,2-氨基-3-甲基-3-亚磺基丁酸峰与6-氨基青霉烷酸峰之间的分离度应大于4.0,6-氨基青霉烷酸峰与舒巴坦峰间的分离度应大于6.0的要求。

对照溶液的色谱图如图2所示。

 

2对照溶液的色谱图

将对照溶液连续进样7针,叠加的色谱图如图3所示,结果见表2。

 

3对照溶液连续进样7针叠加的色谱图

2对照溶液连续进样7针重复性数据统计


由表2中数据可知,对照溶液连续进样7针重复性测试中,舒巴坦峰保留时间的RSD为0.096%,峰面积的RSD为0.487%,具有良好的定性定量重复性。

供试品溶液的色谱图如图4所示。

 

4供试品溶液的色谱图

仪器灵敏度色谱图如图5所示,计算结果见表3。

 

图5 仪器灵敏度的色谱图

表3舒巴坦钠灵敏度计算结果


通过计算,灵敏度溶液的信噪比S/N为446.1。

结论

通过对系统适应性溶液、对照溶液、供试品溶液和灵敏度溶液进行测定,实验结果表明:舒巴坦峰的保留时间为6.167min,2-氨基-3-甲基-3-亚磺基丁酸峰与6-氨基青霉烷酸峰之间的分离度23.316-氨基青霉烷酸峰与舒巴坦峰间的分离度7.27,满足《中国药典(2020年版)》中规定的舒巴坦峰的保留时间约为5~6分钟,2-氨基-3-甲基-3-亚磺基丁酸峰与6-氨基青霉烷酸峰之间的分离度应大于4.0,6-氨基青霉烷酸峰与舒巴坦峰间的分离度应大于6.0的要求;对照溶液连续进样7针重复性测试中,舒巴坦峰保留时间的RSD为0.096%,峰面积的RSD为0.487%,具有良好的定性定量重复性;灵敏度溶液的信噪比S/N为446.1。因此,Wooking K2025高效液相色谱仪对舒巴坦钠有关物质的测定,在保留时间、分离度以及灵敏度等方面均满足《中国药典(2020年版)》的要求。


1:仪器配置清单


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