一、摘要
本文使用悟空K2025高效液相色谱仪测定舒巴坦钠的有关物质。色谱条件:C18色谱柱(4.6×250mm,5μm),流速为1.0mL/min,柱温为40℃,进样量为20μL,检测波长为215nm。实验结果:舒巴坦峰的保留时间为6.167min,2-氨基-3-甲基-3-亚磺基丁酸峰与6-氨基青霉烷酸峰之间的分离度为23.31,6-氨基青霉烷酸峰与舒巴坦峰间的分离度为7.27;对照溶液连续进样7针重复性测试中,舒巴坦峰保留时间的RSD为0.096%,峰面积的RSD为0.487%;灵敏度溶液的信噪比S/N为446.1,均满足《中国药典(2020年版)》的要求。
二、背景
舒巴坦钠,与青霉素类或头孢菌素类联合,用于治疗敏感菌所致的尿路感染、肺部感染、支气管感染、耳鼻喉科感染、腹腔和盆腔感染、胆道感染、败血症、皮肤软组织感染等。。
本品为白色或类白色结晶性粉末;微有特臭。本品在水中易溶,在甲醇中略溶,在乙醇中极微溶解,在丙酮或乙酸乙酯中几乎不溶。
三、实验过程
1 范围
适用于舒巴坦钠有关物质的测定。
2原理
舒巴坦钠及有关物质在215nm处有紫外吸收,使用高效液相色谱法测定。
3 试剂与材料
3.1水:符合GB/T6682的一级水;
3.2 乙腈:色谱纯;
3.3 磷酸二氢钾:分析纯;
3.4磷酸:色谱纯;
3.5 1mol/L磷酸溶液:称取磷酸12.2g,加水定容至100mL;
3.6 5.44g/L磷酸二氢钾溶液(流动相A):称取磷酸二氢钾(3.3)5.44g,用水定容至1L,用1mol/L磷酸溶液调节pH值至4.0;
3.7 氢氧化钠:分析纯;
3.8 1mol/L氢氧化钠溶液:称取氢氧化钠(3.7)0.4g,加水定容至10mL;
3.9 盐酸:分析纯;
3.10 0.1mol/L盐酸溶液:吸取盐酸(3.9)90μL,加水定容至10mL;
3.11 舒巴坦钠对照品;
3.12 6-氨基青霉烷酸对照品;
3.13 6-氨基青霉烷酸溶液:称取6-氨基青霉烷酸对照品(3.12)15mg,加水定容至50mL;
3.14 舒巴坦钠试验用样品。
4 仪器与设备
4.1高效液相色谱仪:K2025 P2二元高压输液泵、K2025 AS自动进样器、K2025 CO柱温箱、K2025 UVD紫外-可见光检测器、Wookinglab色谱工作站;
4.2分析天平:精确到0.0001g;
4.3涡旋振荡器;
4.4容量瓶:10mL、100mL,棕色带刻度。
5 测定步骤
5.1 溶液配制
系统适用性溶液 取舒巴坦钠对照品(3.11)20mg,置50ml量瓶中,加水2mL及0.1mol/L氢氧化钠溶液(3.8)0.5mL使溶解,室温放置10分钟,加0.1mol/L盐酸溶液(3.10)0.5mL及6-氨基青霉烷酸溶液(3.13),用流动相(5.44g/L磷酸二氢钾溶液(3.6):乙腈(3.2)=98:2)稀释至刻度,摇匀;
供试品溶液 取本品适量,加流动相A(3.6)溶解并稀释制成每1ml中约含2.5mg的溶液;
对照溶液 精密量取供试品溶液适量,用流动相A(3.6)定量稀释制成每1ml中约含2.5μg的溶液;
灵敏度溶液 供试品溶液用流动相A(3.6)稀释2000倍。
5.2色谱条件
a)色谱柱:C18色谱柱,4.6×250mm,5μm或者相当的色谱柱;
b)流动相:流动相A 为5.44g/L磷酸二氢钾溶液(3.6),流动相B为乙腈,按下表进行梯度洗脱:
c)流速:1.0mL/min;
d)柱温:40℃;
e)检测器及波长:紫外检测器,检测波长为215nm;
f)进样量:20μL。
6 系统适用性要求
系统适用性溶液色谱图中,2-氨基-3-甲基-3-亚磺基丁酸、6-氨基青霉烷酸及舒巴坦依次出峰,舒巴坦峰的保留时间约为5~6分钟,2-氨基-3-甲基-3-亚磺基丁酸峰与6-氨基青霉烷酸峰之间的分离度应大于4.0,6-氨基青霉烷酸峰与舒巴坦峰间的分离度应大于6.0。
7 实验结果
按照上述色谱条件(5.2)进行采集,系统适用性溶液的色谱图如图1所示,积分结果如表1所示。
图1系统适用性溶液的色谱图
表1系统适用性溶液色谱图积分结果
由表1中数据可知,舒巴坦峰的保留时间为6.167min,2-氨基-3-甲基-3-亚磺基丁酸峰与6-氨基青霉烷酸峰之间的分离度为23.31,6-氨基青霉烷酸峰与舒巴坦峰间的分离度为7.27,满足《中国药典(2020年版)》中规定的舒巴坦峰的保留时间约为5~6分钟,2-氨基-3-甲基-3-亚磺基丁酸峰与6-氨基青霉烷酸峰之间的分离度应大于4.0,6-氨基青霉烷酸峰与舒巴坦峰间的分离度应大于6.0的要求。
对照溶液的色谱图如图2所示。
图2对照溶液的色谱图
将对照溶液连续进样7针,叠加的色谱图如图3所示,结果见表2。
图3对照溶液连续进样7针叠加的色谱图
表2对照溶液连续进样7针重复性数据统计
由表2中数据可知,对照溶液连续进样7针重复性测试中,舒巴坦峰保留时间的RSD为0.096%,峰面积的RSD为0.487%,具有良好的定性定量重复性。
供试品溶液的色谱图如图4所示。
图4供试品溶液的色谱图
仪器灵敏度色谱图如图5所示,计算结果见表3。
图5 仪器灵敏度的色谱图
表3舒巴坦钠灵敏度计算结果
通过计算,灵敏度溶液的信噪比S/N为446.1。
四、结论
通过对系统适应性溶液、对照溶液、供试品溶液和灵敏度溶液进行测定,实验结果表明:舒巴坦峰的保留时间为6.167min,2-氨基-3-甲基-3-亚磺基丁酸峰与6-氨基青霉烷酸峰之间的分离度为23.31,6-氨基青霉烷酸峰与舒巴坦峰间的分离度为7.27,满足《中国药典(2020年版)》中规定的舒巴坦峰的保留时间约为5~6分钟,2-氨基-3-甲基-3-亚磺基丁酸峰与6-氨基青霉烷酸峰之间的分离度应大于4.0,6-氨基青霉烷酸峰与舒巴坦峰间的分离度应大于6.0的要求;对照溶液连续进样7针重复性测试中,舒巴坦峰保留时间的RSD为0.096%,峰面积的RSD为0.487%,具有良好的定性定量重复性;灵敏度溶液的信噪比S/N为446.1。因此,Wooking K2025高效液相色谱仪对舒巴坦钠有关物质的测定,在保留时间、分离度以及灵敏度等方面均满足《中国药典(2020年版)》的要求。
附1:仪器配置清单