一、 摘要

本文使用悟空K2025高效液相色谱仪测定炒紫苏子配方颗粒的特征图谱。色谱条件：C₁₈色谱柱（4.6×250mm，5μm），流速为1mL/min，柱温为35℃，进样量为10μL，检测器为紫外-可见光检测器，以乙腈（2.3）为流动相A，0.1%甲酸水溶液（2.6）为流动相B，采用梯度进行洗脱，检测波长为284nm。实验结果：迷迭香酸峰的理论塔板数为66992；供试品溶液的特征峰个数与《炒紫苏子配方颗粒》中规定的特征峰个数一致，峰1、峰2、峰3、峰5与咖啡酸峰的相对保留时间分别为0.601、0.739、0.845、1.101，峰6、峰7与迷迭香酸峰的相对保留时间分别为0.733、0.950，偏差范围为-6.19~2.46%。因此，Wooking K2025高效液相色谱仪可以满足《炒紫苏子配方颗粒》中对特征图谱测定的需求。

二、 背景

中药配方颗粒是以传统中药饮片为原料，经过提取、分离、浓缩、干燥、制粒、包装等生产工艺，加工制成的一种统一规格、统一剂量、统一质量标准的新型配方用药。

中药配方颗粒的有效成分、性味、归经、主治、功效和传统中药饮片完全一致，保持了传统中药饮片的全部特征，既能保证中医传统的君、臣、佐、使和辨证论治、灵活加减的特点，优于中成药，又免去了病人传统煎煮的麻烦，同时还可灵活地单味颗粒冲服，卫生有效。

炒紫苏子配方颗粒为唇形科植物紫苏的干燥成熟果实经炮制并按标准汤剂的主要质量指标加工制成的配方颗粒，为浅黄色至黄棕色的颗粒；气微香，味淡；具有止咳平喘、降气化痰、健胃消食、润肠通便、调理气血、增强免疫力等功效。

三、 实验过程

1 原理

炒紫苏子配方颗粒试样经80%甲醇溶液超声波辅助提取后，采用梯度洗脱，用紫外-可见光检测器检测，炒紫苏子配方颗粒应呈现8个特征峰。

2 试剂与材料

2.1水：符合GB/T 6682的一级水；

2.2甲醇：色谱纯；

2.3乙腈：色谱纯；

2.4甲酸：色谱纯；

2.5 80%甲醇溶液：取80mL甲醇（2.2），加入20mL水（2.1），混匀；

2.6 0.1%甲酸水溶液：取1mL甲酸（2.4），置于1000mL容量瓶中，用水（2.1）定容至刻度；

2.7咖啡酸标准品：CAS号为331-39-5，纯度98.2%；

2.8迷迭香酸标准品：CAS号为20283-92-5，纯度为99.5%；

2.9 炒紫苏子对照药材；

2.10炒紫苏子配方颗粒。

3 仪器与设备

3.1高效液相色谱仪：K2025 P2二元高压输液泵、K2025 AS自动进样器、K2025 CO柱温箱、K2025 UVD紫外-可见光检测器、Wookinglab色谱工作站；

3.2分析天平：精确到0.0001g；

3.3涡旋振荡器；

3.4超声波清洗机；

3.5离心管：50mL；

3.6微孔滤膜：0.22μm，有机相；

3.7移液器：100μL，1000μL；

3.8容量瓶：10mL，棕色。

4 测定步骤

4.1参照物溶液的制备

4.1.1 对照药材参照物溶液

精密称定紫苏子对照药材（2.9）1g，置于50mL离心管中，加80%甲醇溶液（2.5）25mL，超声处理30分钟，摇匀，过滤，取续滤液，即得。

4.1.2 对照品参照物溶液

精密称定咖啡酸与迷迭香酸对照品适量（2.7~2.8），分别为15.1mg与7.7mg，加甲醇（2.2）溶解并定容至10mL，配制成质量浓度分别为1.51mg/mL、0.77mg/mL的标准储备液，于-4℃密封避光保存；分别移取100μL咖啡酸与1000μL迷迭香酸标准储备液于10mL棕色容量瓶中，用80%甲醇水溶液（2.5）稀释并定容，配制成咖啡酸质量浓度为15.1μg/mL、迷迭香酸质量浓度为77.0μg/mL的混合标准中间工作液，现用现配。

4.2供试品溶液的制备

精密称定炒紫苏子配方颗粒（2.10）0.5g，置于50mL离心管中，加80%甲醇溶液（2.5）50mL，超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用80%甲醇（2.5）补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得。

4.3色谱条件

a）色谱柱：C₁₈色谱柱，4.6×250mm，5μm或者相当的色谱柱；

b）流动相：以乙腈（2.3）为流动相A，0.1%甲酸水溶液（2.6）为流动相B；按下表进行梯度洗脱：

c）流速：1.0mL/min；

d）进样量：10μL；

e）柱温：35℃；

f）检测器及波长：检测器为紫外-可见光检测器，检测波长为284nm。

5 结果

按照上述色谱条件（4.3）进行采集，对照品参照物溶液的色谱图如图1所示，积分结果如表1所示。

 

图1对照品参照物溶液的色谱图

表1 对照品参照物溶液色谱图积分结果

由表1中数据可知，迷迭香酸峰的理论塔板数为66992，满足《炒紫苏子配方颗粒》中迷迭香酸峰理论塔板数应不低于3000的要求。

对照药材参照物溶液的色谱图如图2所示。

 

图2对照药材参照物溶液的色谱图

供试品溶液的色谱图如图3所示，积分结果见表2，特征峰相对保留时间结果见表3。

 

图3供试品溶液的色谱图

表2 供试品溶液色谱图积分结果表

 

由图2~3和表3中数据可知，供试品溶液特征图谱中呈现8个特征峰；峰1、峰2、峰3、峰5与咖啡酸峰的相对保留时间分别为0.601、0.739、0.845、1.101，峰6、峰7与迷迭香酸峰的相对保留时间分别为0.733、0.950，偏差范围为-6.19~2.46%，其相对保留时间均在规定值的±10%范围之内，满足《炒紫苏子配方颗粒》标准的要求。

6 结论

本文使用Wooking K2025高效液相色谱仪测定炒紫苏子配方颗粒的特征图谱。实验结果表明：迷迭香酸峰的理论塔板数为66992，满足《炒紫苏子配方颗粒》中迷迭香酸峰理论塔板数应不低于3000的要求；供试品溶液的特征峰个数与《炒紫苏子配方颗粒》中规定的特征峰个数一致，峰1、峰2、峰3、峰5与咖啡酸峰的相对保留时间分别为0.601、0.739、0.845、1.101，峰6、峰7与迷迭香酸峰的相对保留时间分别为0.733、0.950，偏差范围为-6.19~2.46%，相对保留时间均在规定值的±10%范围之内。因此，Wooking K2025高效液相色谱仪可以满足《炒紫苏子配方颗粒》中对特征图谱测定的需求。

附1：仪器配置清单