一、 摘要

本文使用悟空K2025高效液相色谱仪测定非蛋白饮料中赤藓糖醇的含量。色谱条件：氨基色谱柱（4.6×250mm，5μm），流速为1.0mL/min，柱温为30℃，进样量为20μL，检测器为示差折光检测器，检测池温度为30℃。实验结果：赤藓糖醇的理论塔板数为3878，拖尾因子为1.13；重复性测试中，赤藓糖醇标准溶液连续进样7针，保留时间的RSD为0.145%，峰面积的RSD为1.066%；灵敏度测试中，赤藓糖醇的仪器检出限为0.153mg/mL，仪器定量限为0.509mg/mL；赤藓糖醇在测定浓度范围内具有良好的线性关系，确定系数R²大于0.999；对汽水进行测试，赤藓糖醇的含量为0.41%，其加标回收率为96.9%。因此，Wooking K2025可以满足《GB 5009.279-2016食品安全国家标准 食品中木糖醇、山梨醇、麦芽糖醇、赤藓糖醇的测定》中汽水中赤藓糖醇含量测定的需求。 

二、 背景

赤藓糖醇是一种填充型甜味剂，是四碳糖醇，分子式为C₄H₁₀O₄。赤藓糖醇在自然界中广泛存在，可由葡萄糖发酵制得，为白色结晶粉末，是一种新型的糖醇类食品甜味剂，具有低热量，高稳定性，甜味协调，无吸湿性，无龋齿性等特性，其热量值是所有糖醇中最低的，适用于多种食品。

三、 实验过程

1 范围

适用于非蛋白饮料中赤藓糖醇的含量测定。

2 原理

汽水中的赤藓糖醇经水提取后，使用高效液相色谱分离，用示差折光检测器检测，外标法定量。

3 试剂与材料

3.1 水：符合GB/T 6682的一级水；

3.2 乙腈：色谱纯；

3.3 赤藓糖醇标准品：CAS号 149-32-6，纯度为99.9%；

3.4 滤膜：0.22μm，水相。

4 仪器与设备

4.1 高效液相色谱仪：K2025 P2二元高压输液泵、K2025 AS自动进样器、K2025 CO柱温箱、RI-201H示差折光检测器、Wookinglab色谱工作站；

4.2 分析天平：精确到0.0001g；

4.3 涡旋振荡器；

4.4 超声波清洗机；

4.5 移液器：100μL，1000μL；

4.6 容量瓶：10mL、50mL，棕色带刻度。

5 测定步骤

5.1 标准溶液配制

5.1.1 赤藓糖醇标准储备液的配制

称取400mg（精确至0.1mg）赤藓糖醇标准品（3.3），置于10mL容量瓶中，加水溶解并定容至刻度，摇匀，备用。

5.1.2 赤藓糖醇系列标准工作液的配制

分别准确移取赤藓糖醇标准储备液（5.1.1）各40μL、60μL、80μL、100μL、120μL、150μL、200μL、250μL，加水定容至1mL，配制成质量浓度分别为1.6mg/mL、2.4mg/mL、3.2mg/mL、4.0mg/mL、4.8mg/mL、6.0mg/mL、8.0mg/mL、10.0mg/mL的系列标准工作溶液。

5.2 样品前处理

准确称取10g汽水试样至50mL容量瓶中，加水溶解并定容至刻度线，摇匀，用0.22μm滤膜过滤后，待上机测试。

5.3 色谱条件

a）色谱柱： 氨基色谱柱，4.6×250mm，5μm或者相当的色谱柱；

b）流动相：乙腈：水=80:20；

c）流速：1.0mL/min；

d）进样量：20μL；

e）柱温：30℃；

f）检测器及温度：示差折光检测器，检测池温度为30℃。

6 结果

6.1 重复性测试

按照上述色谱条件（5.3）进行采集，赤藓糖醇标准溶液（浓度为6.0mg/mL）的色谱图如图1所示，积分结果如表1所示。

 

图1赤藓糖醇标准溶液的色谱图

表1 赤藓糖醇标准溶液色谱图积分结果

由表1中数据可知，赤藓糖醇的理论塔板数为3878，拖尾因子为1.13，具有良好的峰形。

将赤藓糖醇标准溶液（浓度为6.0mg/mL）连续进样7针，叠加的色谱图如图2所示，结果见表2。

 

图2 赤藓糖醇标准溶液连续进样7针叠加的色谱图

表2 赤藓糖醇标准溶液进样7针重复性数据统计

由表2中数据可知，赤藓糖醇标准溶液（浓度为6.0mg/mL）连续进样7针重复性测试，保留时间的RSD为0.145%，峰面积的RSD为1.066%，具有良好的定性定量重复性。

6.2 仪器灵敏度测试

灵敏度测试的色谱图如图3所示，计算结果见表3。

 

图3 仪器灵敏度的色谱图

表3仪器灵敏度测试数据

通过计算，赤藓糖醇的仪器检出限为0.153mg/mL，仪器定量限为0.509mg/mL。

6.3 含量测定

6.3.1校准曲线

 按照上述色谱条件（5.3）进行采集，将赤藓糖醇系列标准工作液（5.1.2）上机测定，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制校准曲线，线性方程和确定系数如图4所示。由图4可知，赤藓糖醇在测定浓度范围内呈现良好的线性关系，确定系数R²在0.999以上。赤藓糖醇系列标准工作液叠加的色谱图如图5所示。

 

 

图4赤藓糖醇的校准曲线

 

图5赤藓糖醇系列标准工作液叠加色谱图

6.3.2含量测定

按照步骤5.2对汽水试样进行处理，并进行加标回收实验。依据公式（1）进行计算，空白溶液的色谱图、汽水试样的色谱图及汽水试样加标的色谱图如图6~图8所示。

式中：X----为汽水中赤藓糖醇的含量，单位为百分数%；

ρ----为由校准曲线得出的样液中赤藓糖醇的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）；

V----为样液最终定容体积，单位为毫升（mL）；

m----为试样质量，单位为克（g）；

100、10³----为单位换算系数。

 

 

图6空白溶液的色谱图

 

图7 汽水试样的色谱图

 

图8 汽水试样加标的色谱图

依据公式（1）计算赤藓糖醇的含量，该汽水试样中赤藓糖醇的含量为0.41%，加标回收率为96.90%。

7 结论

通过对赤藓糖醇的理论塔板数、重复性、灵敏度、线性的测试以及对汽水试样中赤藓糖醇的含量进行测定，实验结果表明：赤藓糖醇的理论塔板数为3878，拖尾因子为1.13，具有良好的峰形；赤藓糖醇标准溶液连续进样7针，保留时间的RSD为0.145%，峰面积的RSD为1.066%，具有良好的定性定量重复性；灵敏度测试中，赤藓糖醇的仪器检出限为0.153mg/mL，仪器定量限为0.509mg/mL；赤藓糖醇在测定浓度范围内具有良好的线性关系，确定系数R²大于0.999；对汽水试样进行测试，赤藓糖醇的含量为0.41%，其加标回收率为96.9%。因此，Wooking K2025可以满足《GB 5009.279-2016食品安全国家标准 食品中木糖醇、山梨醇、麦芽糖醇、赤藓糖醇的测定》中汽水中赤藓糖醇含量测定的需求。