本次实验选择金银花配方颗粒样品,使用悟空Wooking K2025高效液相色谱仪对其进行检测,实验结果符合标准,仪器可用于中药配方颗粒特征图谱的表征。
1、仪器与设备:悟空K2025高效液相色谱仪;分析天平(精确到0.0001g);涡旋振荡器;超声波清洗机;容量瓶(10mL,棕色带刻度);具塞锥形瓶(100mL,棕色)。
悟空Wooking K2025高效液相色谱仪
2、试剂与材料:符合GB/T6682的一级水;甲醇(色谱级);乙腈(色谱纯);磷酸(色谱纯);绿原酸对照品(纯度为99.73%);芦丁对照品(纯度为99.51%);木犀草苷对照品(纯度为98.58%);0.22 μm有机相滤膜。
02 样品前处理
参照物溶液的制备:取绿原酸对照品、木犀草苷对照品、芦丁对照品,置棕色容量瓶中,加50%甲醇制成每1mL各含40μg的混合溶液(10℃以下保存);
供试品溶液的制备:取本品适量,研细,取0.4g,置具塞锥形瓶中,加入50%甲醇50mL,超声处理(功率250W,频率35kHz) 45min,取出放冷,过滤即得。
03 色谱条件
①色谱柱: C18 4.6×250mm,5μm或者相当色谱柱
②流动相A:乙腈;流动相B:0.4%磷酸溶液,梯度洗脱程序表如下:
③柱温:35℃
④进样量:10μL(参照物溶液)、15μL(供试品溶液)
⑤流速:1.0mL/min
⑥波长:350nm
04 结果与讨论
1、参照物溶液的色谱图如图1所示:
图1参照物溶液色谱图
2、供试品溶液的色谱图如图2所示,供试品色谱中呈现8个特征峰,与对照药材参照物色谱中的8个特征峰的保留时间相对应,其中峰2、峰4、峰5分别与相应的对照品参照物峰的保留时间相对应。
图2供试品溶液色谱图
(峰2(S):绿原酸;峰4:芦丁;峰5:木犀草苷)
3、供试品溶液色谱图积分表见表1,以绿原酸参照物峰相应的峰为S峰,计算各特征峰与S峰的相对保留时间,各特征峰的相对保留时间均在规定值的±10%范围之内。
表1 供试品溶液色谱峰积分表
05 结论
实验结果表明,使用悟空Wooking K2025高效液相色谱仪测定金银花配方颗粒,供试品溶液的特征峰个数与《金银花配方颗粒》标准中规定的特征峰个数一致,且相对保留时间均在规定值的±10%范围之内;其中木犀草苷峰的理论塔板数为107862,完全满足标准中规定其理论塔板数不低于2000的要求。因此,悟空Wooking K2025高效液相色谱仪可用于中药配方颗粒特征图谱的表征。