相对保留时间（RRT）是目标化合物的保留时间与参比化合物保留时间的比值。与绝对保留时间相比，RRT对色谱柱长度、流动相流速等不改变色谱选择性的参数变化不敏感，因此在液相方法转移、杂质定位等场景中被广泛应用。随着 2025 年版《中国药典》的实施，相对保留时间（RRT）的法定应用场景进一步拓展，成为中药特征图谱、一测多评法定性质控的重要参数，下面我们以款冬花特征图谱为例，介绍相对保留时间在中药质量控制方面的作用。

01 药典案例：款冬花的特征图谱

根据药典规定，款冬花供试品色谱中应呈现10个特征峰，并与对照药材参照物色谱中的10个特征峰的保留时间相对应。与相对保留时间有关的要求如下：

与绿原酸对照品相对应的峰为S1峰，计算峰1、峰3、峰4与S1峰的相对保留时间，规定值分别为0.70、1.85、1.97。

与款冬酮对照品相对应的峰为S2峰，计算峰5～7、峰9～10与S2峰的相对保留时间，规定值分别为0.64、0.67、0.71、1.06、1.14。

所有特征峰的相对保留时间均应在规定值的±10%范围之内。

图1  对照品溶液的色谱图

图2  对照药材参照物溶液的色谱图

图3  供试品溶液的色谱图

（峰1：新绿原酸；峰2（S1）：绿原酸；峰3：芦丁；峰4：异槲皮苷；峰5：异绿原酸B；峰6：异绿原酸A；峰7：异绿原酸C；峰8（S2）：款冬酮；峰10：甲基丁酰3,4-Z-去氢款冬素酯）

02 实验结果

表1  相对保留时间偏差结果表

结果解读：

1、特征峰数量：供试品与对照药材均呈现10个特征峰，保留时间完全对应，出峰数量符合标准

2、基准峰定位：供试品中峰2与峰8精准对应绿原酸（S1）和款冬酮（S2）对照品，基准定位无误

3、RRT偏差计算：以 S1峰为基准，计算峰1、峰3、峰4的相对保留时间，分别为0.69、1.86和1.98；以S2为基准，计算峰5~7、峰9~10的相对保留时间分别为0.62、0.65、0.69、1.07和1.15与规定值的偏差在-3.12%~0.94%范围内，完全符合 2025 版药典规定RRT的±10%范围之内的要求。

03 Wookinglab GxP工作站自动计算RRT

在款冬花这个案例中，我们需要同时以S1（绿原酸） 和S2（款冬酮）两个峰作为基准，分别计算其他8个峰的RRT，并逐一核算偏差。手动计算不仅繁琐，还容易出错。在Wookinglab GxP工作站中，只需几步即可自动完成：

步骤一：选择不少于两个峰的色谱图，命名化合物表。

步骤二：切换至积分结果项“RRT/RPA”，点击开始编辑

步骤三：选择基准峰

步骤四：为其他峰选择基准峰，例如款冬花指纹图谱案例中为除绿原酸、款冬酮以外的峰设置基准峰。

步骤五：获得实际相对保留时间数据，再输入理论相对保留时间，软件自动计算偏差。

悟空仪器Wookinglab GxP工作站中的审计追踪功能可对积分参数、计算方法的修改操作进行全程追溯，保障 RRT 相关数据的真实性与可追溯性，满足数据完整性相关合规要求。