维生素B2又叫核黄素，微溶于水，在中性或酸性溶液中加热呈稳定状态。维生素B2是体内黄酶类辅基的组成部分。

维生素B2作为婴幼儿配方奶粉的重要添加物，是人体必需的营养元素。当体内缺乏维生素B2时，会影响机体的生物氧化，使代谢发生障碍。其病变多表现为口、眼等部位的炎症，如口角炎、唇炎、舌炎、眼结膜炎等，因此维生素B2可用于上述疾病的防治，还可增进人体对铁的吸收。

为了保障科学定量摄入，准确定量检测奶粉中维生素B2的含量对监管奶粉营养成分及安全具有重要意义，为食品、营养学的分析检测和研究提供量值溯源保障。

实验部分：

乳粉中维生素B2的含量测定 高效液相色谱法

【仪器与试剂】

仪器与设备：悟空K2025高效液相色谱仪（配荧光检测器），分析天平（精确到0.0001g），涡旋振荡器，pH计，超声波清洗机，容量瓶（50、100、500、1000mL，棕色带刻度）；

试剂与材料：维生素B2标准品（CAS号：83-88-5，纯度为97.6%），符合GB/T6682的一级水，甲醇、冰乙酸(色谱级)，无水乙酸钠（优级纯），盐酸、氢氧化钠（分析纯），微孔滤膜（0.22µm,水相）。

【样品前处理】

称取5g（精确至0.0001g）乳粉样品于50mL容量瓶中，加水25mL，涡旋混匀，先用1moL/L的盐酸溶液调节pH至1.7，静置，再用1moL/L的氢氧化钠溶液调节pH至4.6，最后用水定容至50mL，混匀后过滤，取续滤液待液相色谱测定。

【色谱条件】

a）色谱柱: C18，4.6×250mm，5μm

b）流动相：0.05mol/L乙酸钠溶液＋甲醇= 65＋35

c）柱温：35℃

d）进样量：20μL

e）流速：1.0 mL/min

f）检测器及波长：荧光检测器，Ex =462nm，Em =522nm

【结果与讨论】：

1. 按照上述色谱条件进行采集，维生素B2标准溶液色谱图如图1所示，经计算维生素B2的理论塔板数为10139，拖尾因子为1.16，具有良好的峰型。

图1维生素B2标准溶液（2.462µg/mL）色谱图

2. 将维生素B2标准溶液逐级稀释至信噪比S/N为3左右，计算仪器的检出限，数据结果见表1。经计算仪器针对维生素B2检出限为0.811ng/mL，定量限为2.702ng/mL。

表1灵敏度测试数据

3. 将系列浓度的维生素B2的标准曲线溶液在HPLC上进行测定，色谱图如图2所示；绘制校准曲线，线性方程及相关系数见图3，标曲的相关系数R2为0.9998，线性关系良好。

图2维生素B2标准溶液系列叠加色谱图

图3维生素B2标准溶液校准曲线

4. 购买市售的乳粉作为样品进行处理并测定，测试样品色谱图如图4所示，经计算该乳粉样品中维生素B2的含量为1.30mg/100g。

图4市售乳粉样品色谱图

【结论】

使用K2025高效液相色谱仪，通过对维生素B2的峰形、重复性、线性、灵敏度测试以及对市售乳粉样品中的维生素B2含量进行测定，目标物维生素B2色谱峰的理论塔板数为10139，对称因子为1.16，具有良好的峰型；重复性测试中，连续进样7针，维生素B2保留时间的RSD为0.038%，峰面积的RSD为0.058%，定性、定量均有良好的重复性；维生素B2的仪器检出限为0.811ng/mL，定量限为2.702ng/mL；线性关系良好，确定系数R2为0.9998；因此，Wooking K2025高效液相色谱仪完全可以满足《GB 5009.85-2016 食品安全国家标准 食品中维生素B2的测定（第一法）》中使用高效液相色谱法测定维生素B2含量的需求。