兽用中药注射液具有安全性好、理化性质稳定、临床验证及应用治愈率高等优点，是治疗家畜疾病的兽药新制剂。

近年来，“鱼腥草注射液”、“炎毒清注射液”、“双黄连注射液”等多个品种的兽用中药注射剂因发生严重不良事件被暂停销售使用，因此，全面开展中药注射剂安全性评价，规范兽用中药注射剂的研制、生产、使用秩序，在国内兽药行业引起广泛关注。

板蓝根注射液为《中国兽药典（2020年版）》收录的中药制剂及成方制剂之一，具有清热解毒的功效，广泛用于家畜流感、仔猪白痢、肺炎及某些发热性疾患。

实验部分：

板蓝根注射液中（R,S）-告依春、鸟苷、尿苷和腺苷的测定

高效液相色谱法

【仪器与试剂】：

仪器与设备：悟空K2025高效液相色谱仪；分析天平（精确到0.0001g）；容量瓶（100mL，带刻度）等；

★ Wooking lab色谱工作站内置了《中国兽药典（2020年版）》高效液相色谱方法库，海量的分析方法可一键快速调用，无需耗费过多人力成本进行方法查阅编辑，为分析工作者的工作提供了便利。

试剂与材料：符合GB/T6682的一级水；甲醇(色谱级)；0.22μm微孔尼龙滤膜；（R,S）-告依春（C₅H₇NOS）；鸟苷（C₁₀H₁₃N₅O₅）；尿苷（C₉H₁₂N₂O₆）；腺苷（C₁₀H₁₃N₅O₄）；

【实验方法】：

样品前处理：

精密量取本品5mL，置于50mL容量瓶中，加5％甲醇至刻度，摇匀，滤过，即得。

标准溶液配制

混合对照品溶液（2µg/mL）：分别称取（R,S）-告依春、鸟苷、尿苷和腺苷各0.2mg，用5%甲醇定容至100mL；

【色谱条件】：

a）色谱柱: C₁₈ 4.6×250mm，5μm或者相当的色谱柱；

b）流动相：流动相A：甲醇；流动相B：水，梯度表如下：

c）柱温：30℃；

d）进样量：20μL；

e）流速：0.5 mL/min；

f）波长：245nm

结果与讨论：

1. 按照上述色谱条件进行采集，对照品和供试品色谱图如下：

将供试品连续进样7针，供试品中（R,S）-告依春、鸟苷、尿苷和腺苷四种物质的保留时间和峰面积重复性数据分析如表1，保留时间的RSD分别为0.080%、0.146%、0.151%和0.033%；峰面积的RSD分别为0.304%、0.360%、0.554%和0.790%，重现性良好。重复性色谱图如图3.

表1. 供试品进样7针重复性数据统计

图3 供试品进样7针叠加色谱图

讨论：

结果表明，使用Wooking K2025 高效液相色谱仪对板蓝根注射液中（R,S）-告依春、鸟苷、尿苷和腺苷进行测定，对照品及供试品的保留时间RSD均小于0.5%（n=7），峰面积的RSD均小于1% (n=7)，满足《中国兽药典（2020年版）》的要求，此方法可为板蓝根注射液中（R,S）-告依春、鸟苷、尿苷和腺苷的测定提供参考。