一、摘要

本文使用悟空K2025高效液相色谱仪测定西洋参中人参皂苷Rg1、Re、Rb1的含量。其连续进样7针的峰面积的重复性完全满足2020年版《中国药典》的要求。

二、背景

西洋参具有补气养阴，清热生津。用于气虛阴亏，虛热烦倦，咳喘痰血，内热消渴，口燥咽干。西洋参为市场上较为常见的名贵药材，其主要的活性成分为皂苷类，如人参皂苷Re、人参皂苷Rb1等。在2020年版《中国药典》中规定了利用高效液相色谱法测定西洋参中人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1的含量以控制药物的质量。

三、实验过程

1 范围

适用于西洋参中人参皂苷Rg1、Re、Rb1的测定。

2 原理

人参皂苷Rg1、Re、Rb1易溶于甲醇，在203nm处有紫外吸收，使用高效液相色谱法进行检测，外标法定量。

3 试剂与材料

3.1 水：符合GB/T6682的一级水；

3.2 乙腈：色谱纯；

3.3 磷酸：优级纯；

3.4 0.1%磷酸水溶液：吸取1mL磷酸用一级水定容至1L，过0.22μm滤膜。

4 仪器与设备

4.1 高效液相色谱仪：K2025 P2二元高压梯度输液泵、K2025 AS自动进样器、K2025 CO柱温箱、K2025 UVD紫外-可见光检测器；Wookinglab色谱工作站

5 测定步骤

5.1样品前处理

对照品溶液制备：取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rb1对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL各含人参皂苷Rg1 0.1mg、人参皂苷Re 0.4mg、人参皂苷Rb1 1mg的溶液，即得。

供试品溶液制备：取本品粉末（过三号筛）约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水饱和的正丁醇50mL，称定重量，置水浴中加热回流提取1.5小时，放冷，再称定重量，用水饱和正丁醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液25mL，置蒸发皿中，蒸干，残渣加50%甲醇适量使溶解，转移至10mL量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

5.2 色谱条件：

a）色谱柱：C18 4.6×250mm，5μm；

b）流动相：A：乙腈；B：0.1%磷酸水溶液；

c）柱温：40℃；

d）进样量：10μL；

e）流速：1mL/min；

f）波长：203nm；

h）梯度洗脱程序见表1：

表1 梯度洗脱程序

6 色谱图及重复性结果

对照品参考色谱图如图1

图1. 对照品参考色谱图

对照品进样7针的色谱图叠加图如图2

图2. 进样7针对照品色谱图的叠加图

表2 进样7针对照品重复性计算结果

供试品参考色谱图如图3

图3 供试品参考色谱图