乳粉中维生素B2的含量测定——高效液相色谱法
2022-05-12
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维生素B2又叫核黄素,微溶于水,在中性或酸性溶液中加热呈稳定状态。维生素B2是体内黄酶类辅基的组成部分。

维生素B2作为婴幼儿配方奶粉的重要添加物,是人体必需的营养元素。当体内缺乏维生素B2时,会影响机体的生物氧化,使代谢发生障碍。其病变多表现为口、眼等部位的炎症,如口角炎、唇炎、舌炎、眼结膜炎等,因此维生素B2可用于上述疾病的防治,还可增进人体对铁的吸收。

为了保障科学定量摄入,准确定量检测奶粉中维生素B2的含量对监管奶粉营养成分及安全具有重要意义,为食品、营养学的分析检测和研究提供量值溯源保障。


实验部分:

乳粉中维生素B2的含量测定 高效液相色谱法


【仪器与试剂】


仪器与设备:悟空K2025高效液相色谱仪(配荧光检测器),分析天平(精确到0.0001g),涡旋振荡器,pH计,超声波清洗机,容量瓶(50、100、500、1000mL,棕色带刻度);


试剂与材料:维生素B2标准品(CAS号:83-88-5,纯度为97.6%),符合GB/T6682的一级水,甲醇、冰乙酸(色谱级),无水乙酸钠(优级纯),盐酸、氢氧化钠(分析纯),微孔滤膜(0.22µm,水相)。


【样品前处理】

称取5g(精确至0.0001g)乳粉样品于50mL容量瓶中,加水25mL,涡旋混匀,先用1moL/L的盐酸溶液调节pH至1.7,静置,再用1moL/L的氢氧化钠溶液调节pH至4.6,最后用水定容至50mL,混匀后过滤,取续滤液待液相色谱测定。


【色谱条件】

a)色谱柱: C18,4.6×250mm,5μm

b)流动相:0.05mol/L乙酸钠溶液+甲醇= 65+35

c)柱温:35℃

d)进样量:20μL

e)流速:1.0 mL/min

f)检测器及波长:荧光检测器,Ex =462nm,Em =522nm


【结果与讨论】:

1. 按照上述色谱条件进行采集,维生素B2标准溶液色谱图如图1所示,经计算维生素B2的理论塔板数为10139,拖尾因子为1.16,具有良好的峰型。

图1维生素B2标准溶液(2.462µg/mL)色谱图

2. 将维生素B2标准溶液逐级稀释至信噪比S/N为3左右,计算仪器的检出限,数据结果见表1。经计算仪器针对维生素B2检出限为0.811ng/mL,定量限为2.702ng/mL。

表1灵敏度测试数据



3. 将系列浓度的维生素B2的标准曲线溶液在HPLC上进行测定,色谱图如图2所示;绘制校准曲线,线性方程及相关系数见图3,标曲的相关系数R2为0.9998,线性关系良好。

图2维生素B2标准溶液系列叠加色谱图

图3维生素B2标准溶液校准曲线

4. 购买市售的乳粉作为样品进行处理并测定,测试样品色谱图如图4所示,经计算该乳粉样品中维生素B2的含量为1.30mg/100g。

图4市售乳粉样品色谱图

【结论】

使用K2025高效液相色谱仪,通过对维生素B2的峰形、重复性、线性、灵敏度测试以及对市售乳粉样品中的维生素B2含量进行测定,目标物维生素B2色谱峰的理论塔板数为10139,对称因子为1.16,具有良好的峰型;重复性测试中,连续进样7针,维生素B2保留时间的RSD为0.038%,峰面积的RSD为0.058%,定性、定量均有良好的重复性;维生素B2的仪器检出限为0.811ng/mL,定量限为2.702ng/mL;线性关系良好,确定系数R2为0.9998;因此,Wooking K2025高效液相色谱仪完全可以满足《GB 5009.85-2016 食品安全国家标准 食品中维生素B2的测定(第一法)》中使用高效液相色谱法测定维生素B2含量的需求。

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