蜂蜜中羟甲基糠醛的含量测定——高效液相色谱法
2022-04-28
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背景:

羟甲基糠醛是蜂蜜中的还原糖经加热、脱水生成的一种黑色具有难闻气味的有毒物质,其反应机理是在酸性条件下,蜂蜜中的氨基化合物与葡萄糖发生Mailard反应或者蜂蜜中的还原糖发生脱水反应,生成羟甲基糠醛。

新鲜蜂蜜中羟甲基糠醛的含量很低,一般不会超过10mg/kg。但在加工和贮藏过程中其含量将逐渐增高,甚至可能超标。羟甲基糠醛的存在会严重影响到蜂蜜食用的安全性,对眼睛、黏膜或皮肤有刺激性,摄入过多会引起中毒,甚至引发癌症、造成动物横纹肌麻痹和内脏损伤。



在国际贸易中羟甲基糠醛属强检指标,要求每千克蜂蜜中羟甲基糠醛的含量应小于40mg。各国也规定了羟甲基糠醛的最高限量,并将之作为判定是否掺有转化糖的依据。


实验部分:

仪器与试剂:

仪器与设备:悟空K2025高效液相色谱仪;分析天平(精确到0.0001g);涡旋振荡器;pH计;容量瓶(10mL、1000mL,棕色带刻度)等。

试剂与材料:羟甲基糠醛标准品(CAS:67-47-0,纯度为99.9%);符合GB/T6682的一级水;甲醇(色谱纯);0.22µm微孔滤膜(有机相)。

实验方法:

样品处理:称取10g蜂蜜试样(精确至0.01g),置于100mL烧杯中,加入10 mL甲醇,用玻璃棒轻轻搅拌均匀,使试样完全溶解。将上述溶液转移至100 mL容量瓶中,用水稀释至刻度,充分混匀。该溶液用0.22μm的滤膜过滤,取续滤液待上机测定。

色谱条件:

a)色谱柱: C18色谱柱4.6×250mm5μm

b)流动相:甲醇+水(1090

c)柱温:30

d)进样量:10μL

e)流速:1.0mL/min

f)波长:285nm

【结果与讨论】:

1. 羟甲基糠醛标准溶液(浓度为2.040µg/mL)色谱图如图1所示:


1 羟甲基糠醛标准溶液色谱图

2. 将羟甲基糠醛标准溶液逐级稀释至信噪比S/N为3左右,计算仪器的检出限,数据结果见表1经计算仪器针对羟甲基糠醛的检出限为0.014µg/mL,定量限为0.048µg/mL。

1灵敏度测试数据


3. 系列羟甲基糠醛标准溶液在HPLC上进行测定,绘制校准曲线,线性方程及相关系数见图2,曲线的相关系数R2为0.9999,线性关系良好;系列浓度溶液色谱图如图3所示。

2 羟甲基糠醛标准溶液校准曲线

3羟甲基糠醛系列浓度标准溶液色谱图

4. 购买市售蜂蜜样品进行处理,并进行加标回收实验,样品加标回收色谱图如图4所示,羟甲基糠醛加标回收率为95.2%。

4 蜂蜜样品加标回收色谱图

【结论】

通过对羟甲基糠醛的色谱峰型、重复性、灵敏度、线性测试以及对蜂蜜样品测试,表明使用K2025高效液相色谱仪测定蜂蜜样品中羟甲基糠醛具有良好的线性关系,确定系数R20.9999;连续进样7针,保留时间的RSD值为0.031%,峰面积的RSD值为0.489%,定性定量均有良好的重复性;羟甲基糠醛的仪器检出限为0.014µg/mL,定量限为0.048µg/mL,加标回收率为95.2%。因此,Wooking K2025高效液相色谱仪完全可以满足《GB/T 18932.18-2003 蜂蜜中羟甲基糠醛含量的测定方法 液相色谱-紫外检测法》测定羟甲基糠醛含量的需求。

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