一、摘要

本文使用悟空K2025高效液相色谱仪测定食品中的苯并(a)芘。色谱条件：C₁₈色谱柱（4.6×250mm，5μm），流速为1.0mL/min，柱温为35℃，进样量为20μL，检测器为荧光检测器，激发波长为384nm，发射波长为406nm。实验结果：苯并(a)芘的理论塔板数为13377，拖尾因子为1.15；灵敏度测试中，苯并(a)芘的仪器检出限为0.002ng/mL，仪器定量限为0.005ng/mL；苯并(a)芘在测定浓度范围内具有良好的线性关系，确定系数R²为0.9999。因此，Wooking K2025高效液相色谱仪满足《GB 5009.27-2016 食品安全国家标准 食品中苯并(a)芘的测定》中苯并(a)芘测定的需求。

二、背景

苯并(a)芘是一种五环多环芳香烃，化学式为C₂₀H₁₂，英文表示为BaP，为无色至淡黄色针状晶体；不溶于水，微溶于乙醇、甲醇，溶于苯、甲苯、二甲苯、氯仿、乙醚、丙酮等。

苯并芘为一种突变原和致癌物质，从18世纪以来，便发现与许多癌症有关，谷类食物、蔬菜、脂肪和油类是摄入苯并(a)芘的主要膳食来源；食物加工例如烧烤、烟熏肉类或鱼类的含量亦较高。

三、实验过程

1 范围

适用于谷物及其制品（稻谷、糙米、大米、小麦、小麦粉、玉米、玉米面、玉米渣、玉米片）、肉及肉制品（熏、烧、烤肉类）、水产动物及其制品（熏、烤水产品）、油脂及其制品中苯并(a)芘的测定。

2原理

苯并(a)芘经乙腈溶解后，经反相液相色谱分离，用荧光检测器检测，根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量。

3 试剂与材料

3.1水：符合GB/T6682的一级水；

3.2甲苯：色谱纯；

3.3乙腈：色谱纯；

3.4苯并(a)芘标准品：CAS号：50-32-8，纯度≥99.0%；

3.5苯并(a)芘标准储备液：准确称取苯并(a)芘标准品（3.4）1mg（精确到0.01mg），置于10mL棕色容量瓶中，用甲苯溶解并定容至刻度，摇匀，即得苯并(a)芘浓度为100μg/mL的标准储备液。避光保存在0℃~5℃的冰箱中，保存期1年；

3.6苯并(a)芘标准中间液：准确吸取0.10mL苯并(a)芘标准储备液（3.5），置于10mL棕色容量瓶中，用乙腈定容至刻度，摇匀，即得苯并(a)芘浓度为1.0μg/mL的标准中间液。避光保存在0℃~5℃的冰箱中，保存期1个月；

3.7苯并(a)芘系列标准工作液：吸取苯并(a)芘标准中间液（3.6）适量，用乙腈稀释，制得苯并(a)芘浓度依次为0.1ng/mL、0.2ng/mL、0.5ng/mL、1.0ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL和20.0ng/mL的系列标准工作液，临用现配；

3.8 0.22μm微孔有机滤膜。                                                                       

4 仪器与设备

4.1高效液相色谱仪：K2025 P2二元高压输液泵、K2025 AS自动进样器、K2025 CO柱温箱、RF-20A 荧光检测器 、K2025ATD模数转换器、Wookinglab色谱工作站；

4.2分析天平：精确到0.0001g；

4.3涡旋振荡器；

4.4容量瓶：10mL，棕色带刻度。

5 色谱条件

(a)色谱柱：C₁₈色谱柱，4.6×250mm，5μm或者相当的色谱柱；

(b)流动相：乙腈：水=88:12；

(c)流速：1.0mL/min；

(d)柱温：35℃；

(e)进样量：20μL；

(f)检测器及波长：荧光检测器，激发波长为384nm，发射波长为406nm。

6 实验结果

6.1峰型测试

按照上述色谱条件（5）进行采集，苯并(a)芘标准溶液（浓度为2.0ng/mL）的色谱图如图1所示，积分结果如表1所示。

 

图1苯并(a)芘标准溶液的色谱图

表1苯并(a)芘标准溶液色谱图积分结果

由表1中数据可知，苯并(a)芘的理论塔板数为13377，拖尾因子为1.15，具有良好的峰型。

6.2仪器灵敏度测试

灵敏度测试的谱图如图2所示，计算结果见表2。

 

图2仪器灵敏度的色谱图

表2仪器灵敏度测试数据

 

由表2中数据可知，苯并(a)芘的仪器检出限为0.002ng/mL，仪器定量限为0.005ng/mL。

6.3校准曲线

按照色谱条件（5），将苯并(a)芘系列标准工作液（3.7）上机测定，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制校准曲线，线性方程和确定系数如图3所示。

 

图3苯并(a)芘的校准曲线

由图3可知，苯并(a)芘在测定浓度范围内呈现良好的线性关系，确定系数R²为0.9999。苯并(a)芘系列标准工作液叠加的色谱图如图4所示。

 

图4苯并(a)芘系列标准工作液叠加色谱图

 

四、结论

本实验对苯并(a)芘的理论塔板数、拖尾因子、灵敏度和线性进行测定，实验结果：苯并(a)芘的理论塔板数为13377，拖尾因子为1.15，具有良好的峰型；灵敏度测试中，苯并(a)芘的仪器检出限为0.002ng/mL，仪器定量限为0.005ng/mL；苯并(a)芘在测定浓度范围内具有良好的线性关系，确定系数R²为0.9999。因此，Wooking K2025高效液相色谱仪满足《GB 5009.27-2016 食品安全国家标准 食品中苯并(a)芘的测定》中苯并(a)芘测定的需求。

附1：仪器配置清单