应用说明：

悟空高效毛细管电泳（HPCE）法测定Iohexol对大鼠肾小球滤过率的影响

摘要

化合物碘海醇可作为一种标记物，通过测量小动物肾小球滤过率（GFR）快速显示肾功能。采用悟空高效毛细管电泳（HPCE）系统和LFII^®技术测定大鼠血浆中碘海醇浓度。分析样品时，除了添加内标物外，不需要样品制备。

所需的小体积样品意味着该方法可用于以造影剂Omnipaque 240的形式从注射碘海醇的大鼠血液样品中测量Iohexol浓度。测量在30, 45和60min时的浓度，使得在大约20min内测定肾小球滤过率，计算肾小球滤过率。

本应用直接适用于猫、狗等伴生动物慢性肾脏病（CKD）的早期诊断和人类诊断。

简介

肾功能通常是通过血液中的代谢生物标志物来评估的，通常是血浆肌酐浓度。然而，这种方法是不可靠的，因为直到超过60%的肾单位已经失去功能，肌酐也可能不会改变，而且还受到肌肉质量等因素的影响。

另一方面，肾小球滤过率（GFR）与功能性肾质量直接相关，因此GFR的定量是肾功能的直接测量。GFR被广泛认为是肾功能的金标准。

GFR可通过Iohexol的清除率来测量，Iohexol是一种造影剂，不能被吸收、代谢或排泄，仅由肾脏清除。为了进行评估，注射碘海醇，然后在指定时间采集三份血清样本。加入内标物（Iopromide）并分析样品以测量Iohexol浓度，该浓度与初始剂量一起用于计算Iohexol清除率，从而计算GFR。

材料与方法

四只大鼠分别于注射30、45、60、90、120、180和240min后取血清，每公斤剂量为1mL。

本报告中的数据是在悟空 HPCE系统上收集的。所有检测均在254nm的直接模式下进行。在全长41.5cm的裸石英毛细管中分离碘海醇和碘普罗米特。珀耳帖冷却系统设置为23°C。

用25%甲醇/75%蒸馏水溶解碘普罗米特内标，浓度为10mg/mL，用Omnipaque 240在犬血清中配制碘海醇，检查结果与大鼠血清不符，原因是后者基质不足。

样品采用电动注射，每个样品注射三次。样品注射之间，用0.1M NaOH冲洗毛细管，然后用缓冲液（TBE+3%（w/v）SDS）修复。

结果与讨论

使用悟空HPCE的广义分离变换（GST）算法进行分离分析。GST是一种将512像素的数据以自然的方式组合起来的方法，它保留了像素的峰值形状信息，同时使信噪比最大化。通常，与从单个像素获取数据的标准CE方法相比，使用GST的信噪比增加了10倍。

图1显示了一个示例性的电泳图，以及空白健康和患病大鼠血浆的电泳图。整个校准曲线的重叠GST电泳图如图2所示。所有复制品在健康和患病血浆中的迁移时间RSD均为0.822%。

图1  1为GST电泳图。以269.6μg/mL碘海醇和150μg/mL碘普罗胺为刺激剂的大鼠血浆；2为空白健康大鼠血浆电泳图；3为空白病鼠血浆电泳图。

图2 浓度33.7～2156.67μg/mL碘海醇（15.625～1000μg/mL碘）的大鼠血浆GST电泳图。

用大鼠血浆和用犬血清进行校准的比较图（见图3）表明，犬血清是一种可接受的替代品（平均准确度差异<2%）。由于缺乏大鼠血浆，本报告使用犬血清校准来产生其余结果。

图3 犬血清和大鼠血浆的重叠校正曲线

图4 用最佳拟合的单指数衰减曲线绘制定时大鼠样本的数据。时间标度为注射后分钟，分析时间为20min。

表1 使用所有七个时间点和前三个时间点生成的AUC（曲线下面积）的比较

图4所示的曲线拟合允许生成曲线下的区域（AUC）。这允许计算GFR，因为肾组织中Iohexhol的清除率与曲线下面积成反比。由此可以看出，调整后的AUC和正常AUC（7）之间有很强的相关性，表明只需要3个数据点，这意味着动物在手术过程中承受的压力较小。

结论

在悟空 HPCE平台上对碘海醇（全方位）的分析为通过肾小球滤过率分析小动物肾功能提供了一种全新的、可靠的工具。

这一数据表明，在注射Omnipaque 240后30、45和60min从大鼠身上采集的三个样本中，可以精确测量AUC，从而计算碘海醇和GFR的清除率。

这为无需牺牲动物的大鼠肾功能提供了一个敏感和准确的评估，允许在一段时间内重复测量肾功能，并检测肾功能的微小变化。

悟空HPCE系统在碘海醇分析中的优点是操作简单，分离速度快。该技术正应用于动物健康和食品配方研究的临床和工业环境中。

用肾小球滤过率（GFR）分析碘海醇（Omnipaque）对慢性肾脏疾病的诊断价值。

化合物碘海醇可作为一种标记物，通过测量小动物肾小球滤过率（GFR）快速显示肾功能。使用悟空HPCE的高效毛细管电泳系统和专利的LFII^®技术测量大鼠血浆中的碘海醇浓度。

分析样品时，除了添加内标物外，不需要样品制备。所需的小体积样品意味着该方法可用于以造影剂Omnipaque 240的形式从注射Iohexol的大鼠血液样品中测量Iohexol浓度。

在30、45和60min时测量浓度可以确定碘海醇的清除率，并计算肾小球滤过率。

该技术直接适用于猫、狗等伴生动物慢性肾脏病（CKD）的诊断，也可用于人类的诊断。