一、摘要

本文使用悟空K2025高效液相色谱仪测定化妆品中卡立普多的含量。色谱条件：C₁₈色谱柱（4.6mm×250mm，5μm），流速为1.0mL/min，柱温为30℃，进样量为10μL，检测器为蒸发光散射检测器。实验结果：卡立普多的理论塔板数为17399，拖尾因子为1.05；重复性测试中，将卡立普多标准溶液连续进样7针，卡立普多保留时间的RSD为0.051%，峰面积的RSD为2.697%；灵敏度测试中，卡立普多的仪器检出限为6.674μg/mL，仪器定量限为22.248μg/mL；卡立普多在测定浓度范围内具有良好的线性关系，确定系数R²大于0.99；对护手霜试样进行测定，卡立普多均未检出，加标回收率为114.2%。因此，Wooking K2025高效液相色谱仪满足《GB/T 40899-2021 化妆品中禁用物质溴米索伐、卡溴脲和卡立普多的测定 高效液相色谱法》中卡立普多含量测定的需求。

二、背景

卡立普多，别名为肌安宁，卡来梯，RELA。为甲丙氨酯的衍生物，白色结晶性粉末，，微具特异臭，易溶于乙醇、氯仿。为中枢性肌肉松弛药，有镇静及抗焦虑作用，用于治疗急性肌肉痉挛及扭伤等。

卡立普多是我国《化妆品安全技术规范（2015年版）》规定的禁用原料。

三、实验过程

1 范围

  适用于水剂类、乳液类和膏霜类化妆品中卡立普多的测定。

2原理

试样经溶剂超声提取后，提取液经离心、氮吹、重新定容并过滤，以配备蒸发光散射检测器的高效液相色谱仪进行测定，根据保留时间初步定性，外标法定量。

3 试剂与材料

3.1水：符合GB/T6682的一级水；

3.2甲醇：色谱纯；

3.3乙腈：色谱纯；

3.4氯化钠：优级纯；

3.5 40%乙腈溶液：量取40mL乙腈（3.3）加入100mL容量瓶中，加水稀释并定容至刻度；

3.6卡立普多对照品：CAS号78-44-4；

3.7卡立普多标准储备液：准确称取一定量的卡立普多对照品（3.6），用40%乙腈溶液（3.5）溶解，配制成浓度为1mg/mL的卡立普多标准储备液，于4℃避光保存，有效期2个月；

3.8卡立普多标准系列工作液：分别准确吸取一定量的卡立普多标准储备液，用40%乙腈溶液（3.5）配制成卡立普多标准系列工作液，浓度依次为50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、300μg/mL和500μg/mL；

3.9护手霜试样；

3.10 0.22μm微孔有机滤膜。                                                                       

4 仪器与设备

4.1高效液相色谱仪：K2025 P2二元高压输液泵、K2025 AS自动进样器、K2025 CO柱温箱、K2025 ELSD蒸发光散射检测器、Wookinglab色谱工作站；

4.2分析天平：精确到0.0001g；

4.3涡旋振荡器；

4.4超声波清洗机；

4.5离心机：转速不低于5000r/min；

4.6氮吹装置；

4.7具塞比色管：10mL，带刻度；

4.8具塞塑料离心管：10mL。

5 测定步骤

5.1 样品处理

称取约1g（精确至0.001g）护手霜试样（3.9），置于10mL具塞比色管（4.7）中，加入甲醇（3.2）并定容至刻度，混匀，加入2g氯化钠（3.4）破乳，超声提取20min，冷却至室温。转移所得悬浮液5mL至具塞塑料离心管（4.8）中，5000r/min离心5min。取上清液1mL氮吹至干，用40%乙腈溶液（3.5）重新定容至1mL，经0.22μm微孔有机滤膜（3.10）过滤，取续滤液，待测。

5.2色谱条件

a）色谱柱：C₁₈色谱柱，4.6mm×250mm，5μm或者相当的色谱柱；

b）流动相：乙腈+水=40+60（体积比），等度洗脱；

c）流速：1.0mL/min；

d）进样量：10μL；

e）柱温：30℃；

f）蒸发光散射检测器：雾化器冷却模式，漂移管温度50℃，载气为氮气，气体流速为3mL/min。

6 实验结果

6.1重复性测试

按照上述色谱条件（5.2）进行采集，卡立普多标准溶液（浓度为200μg/mL）的色谱图如图1所示，积分结果如表1所示。

 

图1卡立普多标准溶液的色谱图

表1卡立普多标准溶液色谱图积分结果

由表1中数据可知，卡立普多的理论塔板数为17399，拖尾因子为1.05，具有良好的峰形。

将卡立普多标准溶液连续进样7针，叠加的色谱图如图2所示，结果见表2。

 

图2卡立普多标准溶液连续进样7针叠加的色谱图

表2卡立普多标准溶液连续进样7针重复性数据统计

 

将卡立普多标准溶液连续进样7针进行重复性测试，卡立普多保留时间的RSD为0.051%，峰面积的RSD为2.697%，具有良好的定性定量重复性。

6.2仪器灵敏度测试

灵敏度测试的谱图如图3所示，计算结果见表3。

 

图3 仪器灵敏度的色谱图

表3仪器灵敏度测试数据

 

由表3中数据可知，卡立普多的仪器检出限为6.674μg/mL，仪器定量限为22.248μg/mL。

6.3含量测定

6.3.1校准曲线

按照色谱条件（5.2），将卡立普多标准系列工作液（3.8）上机测定，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制校准曲线，线性方程和确定系数如图4~图5所示。

                

图4卡立普多的校准曲线

由图4可知，卡立普多在测定浓度范围内呈现良好的线性关系，确定系数R²大于0.99。卡立普多标准系列工作液叠加的色谱图如图5所示。

 

图5卡立普多标准系列工作液叠加的色谱图

6.3.2含量测定

以护手霜作为试样，按照流程（5.1）对其进行处理，并进行加标回收实验。依据公式（1）计算护手霜试样中卡立普多的含量。

式中：ω----为试样中卡立普多的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；

C----为通过校准曲线得到的试样中卡立普多的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；

V----为试样的定容体积，单位为毫升（mL）；

m----为试样的质量，单位为克（g）；

1000----为换算系数。

试样的色谱图及试样加标的色谱图如图6~图7所示。

 

 

 

图6护手霜试样的色谱图

 

图7护手霜试样加标的色谱图

依据公式（1）进行计算，试样中未检测到卡立普多，加标回收率为114.2%。

四、结论

通过对卡立普多的理论塔板数、重复性、灵敏度、线性的测试以及对护手霜试样中卡立普多的含量进行测定，实验结果表明：卡立普多的理论塔板数为17399，拖尾因子为1.05，具有良好的峰形；重复性测试中，将卡立普多标准溶液连续进样7针，卡立普多保留时间的RSD为0.051%，峰面积的RSD为2.697%，具有良好的定性定量重复性；灵敏度测试中，卡立普多的仪器检出限为6.674μg/mL，仪器定量限为22.248μg/mL；卡立普多在测定浓度范围具有良好的线性关系，确定系数R²大于0.99；对护手霜试样进行测定，卡立普多未检出，加标回收率为114.2%。因此，Wooking K2025高效液相色谱仪满足《GB/T 40899-2021 化妆品中禁用物质溴米索伐、卡溴脲和卡立普多的测定 高效液相色谱法》中卡立普多含量测定的需求。