一、摘要
本文使用悟空K2025高效液相色谱仪测定化妆品中卡立普多的含量。色谱条件:C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),流速为1.0mL/min,柱温为30℃,进样量为10μL,检测器为蒸发光散射检测器。实验结果:卡立普多的理论塔板数为17399,拖尾因子为1.05;重复性测试中,将卡立普多标准溶液连续进样7针,卡立普多保留时间的RSD为0.051%,峰面积的RSD为2.697%;灵敏度测试中,卡立普多的仪器检出限为6.674μg/mL,仪器定量限为22.248μg/mL;卡立普多在测定浓度范围内具有良好的线性关系,确定系数R2大于0.99;对护手霜试样进行测定,卡立普多均未检出,加标回收率为114.2%。因此,Wooking K2025高效液相色谱仪满足《GB/T 40899-2021 化妆品中禁用物质溴米索伐、卡溴脲和卡立普多的测定 高效液相色谱法》中卡立普多含量测定的需求。
二、背景
卡立普多,别名为肌安宁,卡来梯,RELA。为甲丙氨酯的衍生物,白色结晶性粉末,,微具特异臭,易溶于乙醇、氯仿。为中枢性肌肉松弛药,有镇静及抗焦虑作用,用于治疗急性肌肉痉挛及扭伤等。
卡立普多是我国《化妆品安全技术规范(2015年版)》规定的禁用原料。
三、实验过程
1 范围
适用于水剂类、乳液类和膏霜类化妆品中卡立普多的测定。
2原理
试样经溶剂超声提取后,提取液经离心、氮吹、重新定容并过滤,以配备蒸发光散射检测器的高效液相色谱仪进行测定,根据保留时间初步定性,外标法定量。
3 试剂与材料
3.1水:符合GB/T6682的一级水;
3.2甲醇:色谱纯;
3.3乙腈:色谱纯;
3.4氯化钠:优级纯;
3.5 40%乙腈溶液:量取40mL乙腈(3.3)加入100mL容量瓶中,加水稀释并定容至刻度;
3.6卡立普多对照品:CAS号78-44-4;
3.7卡立普多标准储备液:准确称取一定量的卡立普多对照品(3.6),用40%乙腈溶液(3.5)溶解,配制成浓度为1mg/mL的卡立普多标准储备液,于4℃避光保存,有效期2个月;
3.8卡立普多标准系列工作液:分别准确吸取一定量的卡立普多标准储备液,用40%乙腈溶液(3.5)配制成卡立普多标准系列工作液,浓度依次为50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、300μg/mL和500μg/mL;
3.9护手霜试样;
3.10 0.22μm微孔有机滤膜。
4 仪器与设备
4.1高效液相色谱仪:K2025 P2二元高压输液泵、K2025 AS自动进样器、K2025 CO柱温箱、K2025 ELSD蒸发光散射检测器、Wookinglab色谱工作站;
4.2分析天平:精确到0.0001g;
4.3涡旋振荡器;
4.4超声波清洗机;
4.5离心机:转速不低于5000r/min;
4.6氮吹装置;
4.7具塞比色管:10mL,带刻度;
4.8具塞塑料离心管:10mL。
5 测定步骤
5.1 样品处理
称取约1g(精确至0.001g)护手霜试样(3.9),置于10mL具塞比色管(4.7)中,加入甲醇(3.2)并定容至刻度,混匀,加入2g氯化钠(3.4)破乳,超声提取20min,冷却至室温。转移所得悬浮液5mL至具塞塑料离心管(4.8)中,5000r/min离心5min。取上清液1mL氮吹至干,用40%乙腈溶液(3.5)重新定容至1mL,经0.22μm微孔有机滤膜(3.10)过滤,取续滤液,待测。
5.2色谱条件
a)色谱柱:C18色谱柱,4.6mm×250mm,5μm或者相当的色谱柱;
b)流动相:乙腈+水=40+60(体积比),等度洗脱;
c)流速:1.0mL/min;
d)进样量:10μL;
e)柱温:30℃;
f)蒸发光散射检测器:雾化器冷却模式,漂移管温度50℃,载气为氮气,气体流速为3mL/min。
6 实验结果
6.1重复性测试
按照上述色谱条件(5.2)进行采集,卡立普多标准溶液(浓度为200μg/mL)的色谱图如图1所示,积分结果如表1所示。
图1卡立普多标准溶液的色谱图
表1卡立普多标准溶液色谱图积分结果
目标物
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保留时间(min)
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峰面积(mAU.s)
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峰高(mAU)
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理论塔板数
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分离度
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对称/拖尾因子
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卡立普多
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11.067
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80.120
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6.385
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17399
|
-
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1.05
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由表1中数据可知,卡立普多的理论塔板数为17399,拖尾因子为1.05,具有良好的峰形。
将卡立普多标准溶液连续进样7针,叠加的色谱图如图2所示,结果见表2。
图2卡立普多标准溶液连续进样7针叠加的色谱图
表2卡立普多标准溶液连续进样7针重复性数据统计
将卡立普多标准溶液连续进样7针进行重复性测试,卡立普多保留时间的RSD为0.051%,峰面积的RSD为2.697%,具有良好的定性定量重复性。
6.2仪器灵敏度测试
灵敏度测试的谱图如图3所示,计算结果见表3。
图3 仪器灵敏度的色谱图
表3仪器灵敏度测试数据
由表3中数据可知,卡立普多的仪器检出限为6.674μg/mL,仪器定量限为22.248μg/mL。
6.3含量测定
6.3.1校准曲线
按照色谱条件(5.2),将卡立普多标准系列工作液(3.8)上机测定,以浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制校准曲线,线性方程和确定系数如图4~图5所示。
图4卡立普多的校准曲线
由图4可知,卡立普多在测定浓度范围内呈现良好的线性关系,确定系数R2大于0.99。卡立普多标准系列工作液叠加的色谱图如图5所示。
图5卡立普多标准系列工作液叠加的色谱图
6.3.2含量测定
以护手霜作为试样,按照流程(5.1)对其进行处理,并进行加标回收实验。依据公式(1)计算护手霜试样中卡立普多的含量。
式中:ω----为试样中卡立普多的含量,单位为毫克每千克(mg/kg);
C----为通过校准曲线得到的试样中卡立普多的浓度,单位为微克每毫升(μg/mL);
V----为试样的定容体积,单位为毫升(mL);
m----为试样的质量,单位为克(g);
1000----为换算系数。
试样的色谱图及试样加标的色谱图如图6~图7所示。
图6护手霜试样的色谱图
图7护手霜试样加标的色谱图
依据公式(1)进行计算,试样中未检测到卡立普多,加标回收率为114.2%。
四、结论
通过对卡立普多的理论塔板数、重复性、灵敏度、线性的测试以及对护手霜试样中卡立普多的含量进行测定,实验结果表明:卡立普多的理论塔板数为17399,拖尾因子为1.05,具有良好的峰形;重复性测试中,将卡立普多标准溶液连续进样7针,卡立普多保留时间的RSD为0.051%,峰面积的RSD为2.697%,具有良好的定性定量重复性;灵敏度测试中,卡立普多的仪器检出限为6.674μg/mL,仪器定量限为22.248μg/mL;卡立普多在测定浓度范围具有良好的线性关系,确定系数R2大于0.99;对护手霜试样进行测定,卡立普多未检出,加标回收率为114.2%。因此,Wooking K2025高效液相色谱仪满足《GB/T 40899-2021 化妆品中禁用物质溴米索伐、卡溴脲和卡立普多的测定 高效液相色谱法》中卡立普多含量测定的需求。