头孢克洛有关物质的测定 高效液相色谱法
2023-10-24
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一、摘要

本文使用悟空K2025高效液相色谱仪测定头孢克洛的有关物质。色谱条件:C18色谱柱(4.6×250mm5μm),流速为1.0mL/min,柱温为35℃,进样量为20μL,检测器为紫外-可见光检测器,检测波长为220nm。实验结果:头孢克洛峰的保留时间23.742min;头孢克洛峰与头孢克洛δ-3-异构体峰之间的分离度10.92头孢克洛峰的拖尾因子为0.96峰面积小于对照溶液主峰面积0.5倍且大于对照溶液主峰面积0.1倍的杂质峰共有10个,且各杂质含量在0.11%~0.29%之间,总杂的含量1.76%对照溶液连续进样7针重复性测试中,头孢克洛保留时间的RSD为0.099%,峰面积的RSD为0.083%;头孢克洛灵敏度溶液的信噪比S/N为101.7。

二、背景

头孢克洛化学名为6R,7R)-7-[(R)-2-氨基-2-苯乙酰氨基]-3-氯-8-氧代-5-硫杂-1-氮杂双环[4.2.0]辛-2-烯-2-甲酸一水合物,为白色至微黄色粉末或结晶性粉末,微臭;在水中微溶,在甲醇、乙醇或二氯甲烷中几乎不溶。

三、实验过程

1 范围

适用于头孢克洛有关物质的测定。

2原理

头孢克洛及其有关物质在220nm处有紫外吸收,使用高效液相色谱法测定。

3 试剂与材料

3.1水:符合GB/T 6682的一级水;

3.2磷酸二氢钠:分析纯;

3.3磷酸:色谱纯;

3.4 0.27%磷酸二氢钠溶液(pH=2.5):称取磷酸二氢钠(3.2)0.27g,加少量水溶解后加水至100mL,用磷酸(3.3)调节pH值至2.5,摇匀;

3.5 流动相A:0.78%磷酸二氢钠溶液(pH=4.0):称取磷酸二氢钠(3.2)7.8g,加少量水溶解后加水至1000mL,用磷酸(3.3)调节pH值至4.0,摇匀;

3.6 乙腈:色谱纯;

3.7流动相B:乙腈(3.6)-0.78%磷酸二氢钠溶液(pH=4.0)(3.5)=45∶55;

3.8头孢克洛对照品;

3.9头孢克洛δ-3-异构体对照品;

3.10头孢克洛试验用样品。                                                                

4 仪器与设备

4.1高效液相色谱仪:K2025 P2二元高压输液泵、K2025 AS自动进样器、K2025 CO柱温箱、K2025 UVD紫外-可见光检测器Wookinglab色谱工作站;

4.2分析天平:精确到0.0001g;

4.3 涡旋振荡器;

4.4超声波清洗机;

4.5 pH计;

4.6容量瓶:10mL、100mL、1000mL,棕色带刻度。

5 测定步骤

5.1 溶液配制

系统适用性溶液:取头孢克洛对照品(3.8)和头孢克洛δ-3-异构体对照品(3.9)各适量,加0.27%磷酸二氢钠溶液(pH=2.5)(3.4)溶解并稀释制成每1mL中各约含25μg和50μg的混合溶液

供试品溶液:取本品约50mg,置于10mL容量瓶中,加0.27%磷酸二氢钠溶液(pH=2.5)(3.4)溶解并稀释至刻度,摇匀;

对照溶液:精密量取供试品溶液1mL,置于100mL容量瓶中,用0.27%磷酸二氢钠溶液(pH=2.5)(3.4)稀释至刻度,摇匀;

灵敏度溶液供试品溶液用0.27%磷酸二氢钠溶液(pH=2.5)(3.4)稀释2000倍

5.2色谱条件

a)色谱柱:C18色谱柱,4.6×250mm,5μm或者相当的色谱柱;

b)以0.78%磷酸二氢钠溶液3.5)为流动相A,以乙腈(3.6)-0.78%磷酸二氢钠溶液(pH=4.0)(3.5)=45∶55为流动相B(3.7),按照下表进行梯度洗脱:

 

c)流速:1.0mL/min;

d)柱温:35℃;

e)检测器及波长:检测器为紫外-可见光检测器,检测波长为220nm;

f)进样量:20μL。

6 系统适用性要求

系统适用性溶液色谱图中,头孢克洛峰的保留时间约为23分钟,头孢克洛峰与头孢克洛δ-3-异构体峰之间的分离度应不小于2.0,头孢克洛峰的拖尾因子应小于1.2。

7 限度

供试品溶液色谱图中如有杂质峰,单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0.5倍(0.5%),各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的2倍(2%),小于对照溶液主峰面积0.1倍的峰忽略不计。

8实验结果

按照上述色谱条件(5.2)进行采集,系统适用性溶液的色谱图如图1所示,积分结果如表1所示

由表1中数据可知,头孢克洛峰的保留时间23.742min,满足《中国药典(2020年版)二部》中头孢克洛峰的保留时间约为23分钟的要求;头孢克洛峰与头孢克洛δ-3-异构体峰之间的分离度10.92,满足《中国药典(2020年版)二部》中头孢克洛峰与头孢克洛δ-3-异构体峰之间的分离度应不小于2.0的要求;头孢克洛峰的拖尾因子为0.96,满足《中国药典(2020年版)二部》头孢克洛峰的拖尾因子应小于1.2的要求。

供试品溶液的色谱图如图2所示积分结果如表2所示

 

 

 

2供试品溶液的色谱图

2供试品溶液色谱图积分结果

 

对色谱图中主峰及各个杂质峰进行积分,依据公式(1)计算各杂质的含量。

由表2中数据可知,峰面积小于对照溶液主峰面积0.5倍且大于对照溶液主峰面积0.1倍的杂质峰共有10个,且各杂质含量在0.11%~0.29%之间;总的含量为1.76%,不大于限度2%。

对照溶液的色谱图如图3所示。

 

3对照溶液的色谱图

将对照溶液连续进样7针,叠加的色谱图如图4所示,统计结果见表3。

 

4对照溶液连续进样7针叠加的色谱图

表3对照溶液连续进样7针重复性数据统计


 由表3中数据可知,对照溶液连续进样7针重复性测试,头孢克洛保留时间的RSD为0.099%,峰面积的RSD为0.083%,具有良好的定性定量重复性。

灵敏度溶液的色谱图如图5所示,灵敏度计算结果见表4。

 

5 仪器灵敏度的色谱图

 

由表4中数据可知,头孢克洛灵敏度溶液的信噪比S/N为101.7。

9 结论

通过对系统适用性溶液、供试品溶液、对照溶液和灵敏度溶液进行测定,实验结果表明:头孢克洛峰的保留时间23.742min,满足《中国药典(2020年版)二部》中头孢克洛峰的保留时间约为23分钟的要求;头孢克洛峰与头孢克洛δ-3-异构体峰之间的分离度10.92,满足《中国药典(2020年版)二部》中头孢克洛峰与头孢克洛δ-3-异构体峰之间的分离度应不小于2.0的要求;头孢克洛峰的拖尾因子为0.96,满足《中国药典(2020年版)二部》头孢克洛峰的拖尾因子应小于1.2的要求;峰面积小于对照溶液主峰面积0.5倍且大于对照溶液主峰面积0.1倍的杂质峰共有10个,且各杂质的含量在0.11%~0.29%之间;总的含量为1.76%,不大于限度2%;对照溶液连续进样7针重复性测试中,头孢克洛保留时间的RSD为0.099%,峰面积的RSD为0.083%,具有良好的定性定量重复性;头孢克洛灵敏度溶液的信噪比S/N为101.7。因此,Wooking K2025高效液相色谱仪对头孢克洛有关物质的测定,在出峰时间、分离度及拖尾因子等方面均满足《中国药典(2020年版)二部》的要求。


1:仪器配置清单


 

 

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