一、摘要

本文使用悟空K2025高效液相色谱仪测定阿奇霉素的含量。色谱条件：C₁₈色谱柱（4.6×250mm，5μm），流速为1.0mL/min，柱温为30℃，进样量为50μL，检测波长为210nm。实验结果：阿奇霉素峰的理论塔板数为13412，满足《中国药典（2020年版）》中规定的理论塔板数按阿奇霉素峰计算不低于3000的要求；在连续进样7针的重复性测试中，阿奇霉素峰保留时间的RSD为0.148%，峰面积的RSD为0.376%；阿奇霉素的仪器检出限为0.570μg/mL，仪器定量限为1.898μg/mL；阿奇霉素在测定浓度范围内具有良好的线性关系（R²＞0. 9999）。对供试品进行测定，供试品中阿奇霉素的含量为101.2%。因此，Wooking K2025高效液相色谱仪可以满足《中国药典（2020年版）》中阿奇霉素含量测定的需求。

二、背景

本品为白色至类白色结晶性粉末；无臭；微有引湿性；在甲醇、丙酮、无水乙醇或稀盐酸中易溶，在乙腈中溶解，在水中几乎不溶。由《中国药典（2020年版）二部》所收录，为抗菌素药。

三、实验过程

1 范围

适用于阿奇霉素含量的测定。

2原理

阿奇霉素在210nm处有紫外吸收，使用高效液相色谱法测定，外标法定量。

3 试剂与材料

3.1水：符合GB/T6682的一级水；

3.2乙腈：色谱纯；

3.3 磷酸氢二钾：分析纯；

3.4 磷酸：色谱纯；

3.5 20%磷酸溶液：取10mL磷酸（3.4），用水定容至50mL；

3.6 流动相：磷酸氢二钾溶液（称取磷酸氢二钾（3.3）8.7g，加水至1000mL，用20%磷酸溶液（3.5）调节pH值至8.2）-乙腈（3.2）=45:55；

3.7 阿奇霉素对照品。

4 仪器与设备

4.1高效液相色谱仪：K2025 P2二元高压输液泵、K2025 AS自动进样器、K2025 CO柱温箱、K2025 UVD紫外-可见光检测器、Wookinglab色谱工作站；

4.2分析天平：精确到0.0001g；

4.3pH计：精确到0.01；

4.4真空抽滤装置；

4.5涡旋振荡器；

4.6 50mL容量瓶。

5 测定步骤

5.1 标准溶液的配制

5.1.1 阿奇霉素标准储备液：取阿奇霉素对照品（3.7）适量，加乙腈（3.2）溶解并定量稀释配制成每1mL中含1mg的溶液。

5.1.2 阿奇霉素系列标准工作液：分别取阿奇霉素标准储备液（5.1.1）适量，用乙腈（3.2）配制成阿奇霉素浓度依次为0.05mg/mL、0.10mg/mL、0.20mg/mL、0.50mg/mL、1.0mg/mL的系列标准工作液。

5.2色谱条件

a）色谱柱： C₁₈，4.6×250mm，5µm；

b）流动相：详见3.6；

c）流速：1.0mL/min；

d）柱温：30℃；

e）检测器及波长：紫外-可见光检测器，检测波长为210nm；

f）进样量：50μL。

6 实验结果

6.1 重复性测试

按照上述色谱条件（5.2）进行采集，阿奇霉素标准溶液（浓度为0.20mg/mL）的色谱图如图1所示，积分结果如表1所示。

图1 阿奇霉素标准溶液的色谱图

表1 阿奇霉素标准溶液色谱图积分结果

由表1中数据可知，阿奇霉素峰的理论塔板数为13412。

将阿奇霉素标准溶液连续进样7针，叠加的色谱图如图2所示，结果见表2。

图2 阿奇霉素标准溶液的色谱图

表2 阿奇霉素标准溶液连续进样7针重复性数据统计

将标准溶液连续进样7针进行重复性测试，阿奇霉素保留时间的RSD为0.148%，峰面积的RSD为0.376%，具有良好的定性定量重复性。

6.2仪器灵敏度测试

灵敏度测试的色谱图如图3所示，计算结果见表3。

图3 仪器灵敏度的色谱图

表3 仪器灵敏度测试数据

通过计算，阿奇霉素的仪器检出限为0.570μg/mL，仪器定量限为1.898μg/mL。

6.3含量测定

6.3.1 校准曲线

按照色谱条件（5.2），将阿奇霉素系列标准工作液（5.1.2）上机测定，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制校准曲线，线性方程和确定系数如图4所示。由图4可知，阿奇霉素在测定浓度范围内呈现良好的线性关系，确定系数R²＞0.9999。阿奇霉素系列标准工作液叠加的色谱图如图5所示。

图4 阿奇霉素的校准曲线

图5 阿奇霉素系列标准工作液叠加的色谱图

6.3.2 供试品测定

供试品溶液：取供试品适量，精密称定，加乙腈（3.2）溶解并定量稀释制成每1 mL中约含1mg的溶液。

按照步骤5.2对供试品溶液进行采集，依据公式（1）进行计算，空白溶液的色谱图、供试品溶液的色谱图如图6~图7所示。

式中：ω----为试样中阿奇霉素的含量，单位为百分数（%）；

C----为通过校准曲线得到的供试品溶液中阿奇霉素的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）；

V----为试样的定容体积，单位为毫升（mL）；

m----为试样的质量，单位为克（g）；

10³和100----为换算系数。

图6 空白溶液的色谱图

图7 供试品溶液的色谱图

由公式（1）计算供试品中阿奇霉素的含量，该供试品中阿奇霉素的含量为101.2%。

四、结论

通过对阿奇霉素的理论塔板数、重复性、灵敏度、线性进行测试，实验结果表明：阿奇霉素峰的理论塔板数为13412，满足《中国药典（2020年版）》中规定的理论塔板数按阿奇霉素峰计算不低于3000的要求；在重复性测试中，阿奇霉素标准溶液连续进样7针，保留时间的RSD为0.148%，峰面积的RSD为0.376%，具有良好的定性定量重复性；阿奇霉素的仪器检出限为0.570μg/mL，仪器定量限为1.898μg/mL；阿奇霉素在测定浓度范围内具有良好的线性关系（R²＞0. 9999）。对供试品进行测定，供试品中阿奇霉素的含量为101.2%。因此，Wooking K2025高效液相色谱仪可以满足《中国药典（2020年版）》中阿奇霉素含量测定的需求。