西洋参中人参皂苷Rg1、Re、Rb1的测定 高效液相色谱法
2020-06-29
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一、摘要

本文使用悟空K2025高效液相色谱仪测定西洋参中人参皂苷Rg1ReRb1的含量。其连续进样7针的峰面积的重复性完全满足2020年版《中国药典》的要求。

二、背景

西洋参具有补气养阴,清热生津。用于气虛阴亏,虛热烦倦,咳喘痰血,内热消渴,口燥咽干。西洋参为市场上较为常见的名贵药材,其主要的活性成分为皂苷类,如人参皂苷Re、人参皂苷Rb1等。在2020年版《中国药典》中规定了利用高效液相色谱法测定西洋参中人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1的含量以控制药物的质量。

三、实验过程

1 范围

适用于西洋参中人参皂苷Rg1ReRb1的测定

2 原理

人参皂苷Rg1ReRb1易溶于甲醇,在203nm处有紫外吸收,使用高效液相色谱法进行检测,外标法定量。

3 试剂与材料

3.1 水:符合GB/T6682的一级水;

3.2 乙腈:色谱纯;

3.3 磷酸:优级纯;

3.4 0.1%磷酸水溶液:吸取1mL磷酸用一级水定容至1L,过0.22μm滤膜。

4 仪器与设备

4.1 高效液相色谱仪:K2025 P2二元高压梯度输液泵、K2025 AS自动进样器、K2025 CO柱温箱、K2025 UVD紫外-可见光检测器Wookinglab色谱工作站

5 测定步骤

5.1样品前处理

对照品溶液制备:取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rb1对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1mL各含人参皂苷Rg1 0.1mg、人参皂苷Re 0.4mg、人参皂苷Rb1 1mg的溶液,即得。

供试品溶液制备:取本品粉末(过三号筛)约1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加水饱和的正丁醇50mL,称定重量,置水浴中加热回流提取1.5小时,放冷,再称定重量,用水饱和正丁醇补足减失的重量,摇匀,滤过。精密量取续滤液25mL,置蒸发皿中,蒸,残渣加50%甲醇适量使溶解,转移至10mL量瓶中,加50%甲醇至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。

5.2 色谱条件:

a)色谱柱:C18 4.6×250mm5μm

b)流动相:A:乙腈;B0.1%磷酸水溶液;

c)柱温:40℃

d)进样量:10μL

e)流速:1mL/min

f)波长:203nm

h)梯度洗脱程序见表1

1 梯度洗脱程序

时间/min

A%乙腈)

B%0.1%磷酸水溶液)

0

19

81

25

20

80

60

40

60

90

55

45

100

60

40

110

19

81

120

19

81

6 色谱图及重复性结果

对照品参考色谱图如图1


1. 对照品参考色谱图

对照品进样7针的色谱图叠加图如图2

2. 进样7针对照品色谱图的叠加图

2 进样7针对照品重复性计算结果

1 Rg1

对照品1

对照品2

对照品3

对照品4

对照品5

对照品6

对照品7

平均值

SD

RSD%

保留时间

33.760

33.818

33.675

33.755

33.685

33.747

33.675

33.731

0.054

0.161

峰面积

406.775

406.708

409.409

410.531

407.131

407.826

410.157

408.362

1.637

0.401

2 Re

对照品1

对照品2

对照品3

对照品4

对照品5

对照品6

对照品7

平均值

SD

RSD%

保留时间

34.550

34.602

34.470

34.542

34.482

34.532

34.472

34.521

0.049

0.142

峰面积

1203.446

1205.585

1212.382

1214.792

1204.29

1206.646

1213.277

1208.631

4.700

0.389

3 Rb1

对照品1

对照品2

对照品3

对照品4

对照品5

对照品6

对照品7

平均值

SD

RSD%

保留时间

54.850

54.860

54.808

54.873

54.813

54.84

54.833

54.840

0.024

0.043

峰面积

2855.097

2858.418

2876.438

2878.897

2856.686

2860.233

2877.542

2866.187

10.837

0.378


供试品参考色谱图如图3



3 供试品参考色谱图

进样7针供试品色谱图叠加图如图4

4 进样7针供试品色谱图叠加图

3 进样7针供试品重复性计算结果

1 Rg1

供试品1

供试品2

供试品3

供试品4

供试品5

供试品6

供试品7

平均值

SD

RSD%

保留时间

33.755

33.69

33.705

33.785

33.745

33.788

33.837

33.758

0.051

0.150

峰面积

131.802

131.307

131.923

132.136

132.972

132.87

132.272

132.183

0.589

0.446

2 Re

供试品1

供试品2

供试品3

供试品4

供试品5

供试品6

供试品7

平均值

SD

RSD%

保留时间

34.548

34.487

34.5

34.57

34.535

34.587

34.622

34.550

0.048

0.138

峰面积

1909.479

1914.707

1910.289

1912.251

1915.361

1918.142

1917.844

1914.010

3.453

0.180

3 Rb1

供试品1

供试品2

供试品3

供试品4

供试品5

供试品6

供试品7

平均值

SD

RSD%

保留时间

54.923

54.895

54.87

54.895

54.87

54.918

54.907

54.897

0.021

0.039

峰面积

4592.244

4604.912

4600.139

4605.279

4614.771

4623.34

4625.138

4609.403

12.166

0.264



7 结论

采用悟空仪器 K2025高效液相色谱仪对西洋参中的人参皂苷Rb1Rg1Re进行测定,实验结果表明,在连续梯度洗脱条件下,连续进样7针对照品及供试品Rg1ReRb1保留时间RSD均小于0.20%;连续进样7针对照品及供试品Rg1ReRb1峰面积RSD均小于0.50%,满足药典小于2.0%的要求。因此,使用悟空仪器 K2025的高效液相色谱仪测定西洋参中的人参皂苷Rb1Rg1Re有良好的重复性。








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