燕窝中唾液酸含量测定方法:高效液相色谱法
2021-01-25
分享到:



唾液酸,俗名燕窝酸,为燕窝中最珍贵的营养成分,学名叫"N-乙酰基神经氨酸",是一种天然存在的碳水化合物。它最初由颌下腺粘蛋白中分离而出,也因此而得名。唾液酸通常以低聚糖,糖脂或者糖蛋白的形式存在。

 

唾液酸是一系列神经氨酸的衍生物,在生物界中是一种普遍存在的物质,广泛存在于脊椎动物、哺乳动物及多种植物组织中,是细胞膜蛋白的重要组成部分。燕窝含有高达8%以上的唾液酸,据研究分析表示,燕窝中的唾液酸含量是普通物质中唾液酸含量的50倍,并且燕窝是唯一能直接从食物中获取大量唾液酸的途径。

 

1.唾液酸智力发育的"脑黄金"

生物医学研究中指出,母乳中的唾液酸与儿童早期智力发展水平有直接关系,唾液酸可促进大脑神经細胞的资讯传达速度,通过与大脑細胞膜及突触的相互作用,提高大脑的反应速度。因此給婴幼儿补充唾液酸,可以增加大脑智力发育,从而提高记忆力。

 

2.唾液酸排毒抗菌,提高人体免疫力

唾液酸不会被消化道的酶降解,它所形成的糖蛋白可阻断病原体对上皮细胞的附着,能够提高细胞辨别能力、霍乱毒素解毒、预防病理性大肠杆菌的感染、调控血液蛋白质的半衰期,从而有效提高人体免疫机能。同时燕窝可以提高肠道对于维生素及矿物质的吸收能力,提高婴儿与母亲的免疫能力,让胎儿更强壮。

 

3.唾液酸延缓细胞老化,延年益寿

人体细胞表面有一层厚厚的唾液酸层,调节細胞寿命与细胞资讯传达,唾液酸的缺乏可导致新陈代谢中血球寿命以及酶蛋白的減少。口服燕窝可以提高体内唾液酸的浓度,防止细胞表面的唾液酸脱落,延缓细胞老化,有延年益寿的作用。

 

只是随着燕窝产品的不断增多,市面上各种产品也鱼龙混杂,为了规范燕窝产品的市场,中国药文化研究会分别在2018年及2020年发布了即食燕窝及鲜炖燕窝的团体标准。

 

T/CPCS 001-2018 即食燕窝》及《T/CPCS 001-2020 鲜炖燕窝》中规定了唾液酸的含量,规范了燕窝产品的市场。

 

唾液酸含量的测定是燕窝产品必要的检测项目,本实验采用高效液相色谱法测定燕窝及其制品中的唾液酸含量。

实验部分

高效液相色谱法测定燕窝及其制品中的唾液酸 

仪器与试剂

仪器

Wooking K2025高效液相色谱仪、分析天平、恒温水浴锅。

 

K2025高效液相色谱仪

试剂

乙腈、冰乙酸、磷酸、唾液酸(N—乙酰神经氨酸,C11H19NO9):纯度大于99%

实验方法

 

干燕窝

取适量试样105℃烘干60min,放在干燥器中冷却,用研钵研成细粉,准确称取试样0.1g(精确至0.0001g),于25mL比色管中,加入50%乙酸溶液10mL,盖玻璃塞,置于100℃水浴中水解10min,取出比色管,冷却至室温,将水溶液转移至100mL容量瓶中,用流动相定容至刻度,混匀,取上清液用0.45µm针筒式过滤,待测。         

冰糖燕窝制品

取适量试样于烧杯中,以转速10000r/min匀浆3min,静置至泡沫消除,准确称取试样10g(精确至0.01g),置于透析袋中(试样体积不超过透析袋容积的20%),扎紧透析袋两端,置于1000mL烧杯中在流水下透析24h,透析后,将此透析袋浸泡于10%聚乙二醇溶液中使水析出,至袋中试液体积小于5mL,将试液转移至5mL比色管中,加少量水冲洗透析袋合并至比色管中,加等体积冰乙酸,使水解液中乙酸浓度为50%。用玻璃塞塞好比色管,置于100℃水浴中水解10min,取出比色管冷却至室温。将水解液转移至100mL容量瓶中,用流动相定容至刻度,混匀,取上清液用0.45μm针筒式过滤器过滤,待测。

色谱参考条件

仪器高效液相色谱仪:K2025 P2二元高压输液泵、K2025 AS自动进样器、K2025 CO柱温箱、K2025 UVD紫外-可见光检测器、Wookinglab色谱工作站;

色谱柱: 300SCX 阳离子交换色谱柱 4.6×250mm5μm或者相当的色谱柱;

流动相:乙腈-0.1%磷酸水溶液(90+10,体积比)

柱温:30℃

进样量:10μL

流速:1.0mL/min

波长:205nm

结果与讨论

实验结果

按照上述色谱条件进行采集,唾液酸标准溶液色谱图和样品色谱图如下:

 

标准品st100溶液色谱图

 

1 对照品st100溶液色谱图

 

干燕窝色谱图

 

2 干燕窝溶液色谱图

 

冰糖燕窝制品色谱图

3 冰糖燕窝制品色谱图

标准曲线的线性

将浓度为102050100200µg/mL唾液酸标准品系列在HPLC上进行测定,以浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制校准曲线,线性方程及相关系数见图4,在此浓度范围内,曲线的相关系数为0.9999,线性关系良好。

 

4 唾液酸标准品浓度系列曲线

进样重复性测试

连续进样7针标准品,定性定量的重复性如图5及表1

 

5 标准品进样7针叠加色谱图

 

标准品进样7针重复性数据统计

 

对照品进行7针重复性测试,保留时间的RSD0.106%,峰面积的RSD0.208%

 

干燕窝样品的重复性

连续进样7针干燕窝样品,定性定量的重复性如表2

 

2 干燕窝样品进样7针重复性数据统计

 

样品进行7针重复性测试,保留时间的RSD0.136%,峰面积的RSD0.311%

 

冰糖燕窝样品的重复性

连续进样7针冰糖燕窝样品,定性定量的重复性如表3

 

3 冰糖燕窝样品进样7针重复性数据统计

 

样品进行7针重复性测试,保留时间的RSD0.174%,峰面积的RSD0.455%

 

结论

结果表明,使用Wooking K2025 高效液相色谱仪对干燕窝及冰糖燕窝制品中唾液酸含量进行测定,样品及标准品的保留时间的RSD均小于0.2% (n=7),峰面积的RSD均小于0.5% (n=7),满足GB/T 30636-2014标准的要求。此方法可为干燕窝及冰糖燕窝制品中的唾液酸含量的测定提供参考。  

 

参考文献

GB/T 30636-2014 燕窝及其制品中唾液酸的测定 液相色谱法

 

相关产品
悟空仪器
服务热线:0531-88874444          服务邮箱:China@hanon.cc
版权所有(C) 山东悟空仪器有限公司 | 网站地图|友情链接| 鲁ICP备10017404号    
0531-88874444