抗病毒药物中利巴韦林的检测 高效毛细管电泳法
2020-12-29
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利巴韦林又名病毒唑,是广谱强效的抗病毒药物,属合成核苷类药,对许多DNA和RNA病毒有抑制作用。

美国食品药物管理局只许可用于配合长效干扰素治疗丙肝、人类呼吸道融合病毒,和某些出血热的治疗。利巴韦林1970年由ICN制药公司Joseph T. Witkowski合成。

美国食品药物管理局明确指出利巴韦林不适合用来治疗流感,并且严格明确适应症,但滥用利巴韦林来治疗各种病毒感染的情况在中国十分普遍

马伊琍曾在2015年3月发过的一条微博,质疑国内滥用利巴韦林,受到许多网友的关注,大家对于利巴韦林的评价褒贬不一。

 

到目前为止,利巴韦林颗粒物并没有被禁止使用,还是能够在药房购买到的。

利巴韦林颗粒物的忌讳并不是很多,对治疗药物成份皮肤过敏的病人严禁应用,孕妇、本身免疫性肝炎病人严禁服药。利巴韦林颗粒物有一定的毒副作用,能够造成溶血性贫血,其他普遍的副作用有恶心、呕吐、疲惫、头痛等。该治疗药物还能够导致心肌损害,病人在吃药过程中假如出现心脏病恶变的状况,要马上断药。

 

 

利巴韦林(Ribavirin),化学名为1-β-D-呋喃核糖基-1H-1,2,4-三氮唑-3-羧酰胺,分子式为C8H12N4O,为白色或类白色结晶性粉末,无臭,在水中易溶,在乙醇中微溶,在乙醚或二氯甲烷中不溶,为抗非逆转录病毒药。

中国卫生行业标准《WS/T 686-2020消毒剂与抗抑菌剂中抗病毒药物检测方法与评价要求》中给出了两种利巴韦林的检测方法:电渗流反转的毛细管电泳法和超高效液相色谱-串联质谱确证方法。相较于超高效液相色谱-串联质谱确证方法,电渗流反转的毛细管电泳法具有前处理简单、定量快速准确、精密度高等优势,是抗病毒药物中利巴韦林检测的理想手段。


1 仪器与试剂

1.1仪器

高效毛细管电泳HPCE512涡旋混合器,分析天平超声波清洗机         

1.2试剂

硼砂,硼酸,十六烷基三甲基溴化铵CTAB),氢氧化钠。

2 实验方法

2.1溶液配制

1缓冲液的制备

运行缓冲液配制:60mmol/L硼砂+100mmol/L硼酸+0.5mmol/L CTAB

分别称取0.309g硼酸、1.144g硼砂和0.009g CTAB ,置于同一离心管中,加水至40mL振摇溶解,再加水至50mL刻度,混匀备用。

样品提取液配制:将运行缓冲液稀释10倍即可。

2对照品溶液的制备

准确称取10mg利巴韦林对照品,置于10mL 离心管中,用水稀释、定容至刻度,即利巴韦林的浓度为1000mg/L。将1000mg/L利巴韦林储备液稀释10倍制成100mg/L利巴韦林工作液。

标准系列的配制:用样品提取液稀释工作液,配制成利巴韦林浓度为1.5mg/L 、5mg/L、10mg/L、20mg/L50mg/L的系列标准溶液。

2.2 样品前处理

称取0.5 g(精确至1 mg)试样于10 mL具塞带刻度离心管中,加入样品提取溶液至10 mL 刻度,加入1至2颗玻璃珠,涡旋混匀至溶液呈均匀状态,超声10 min,备用。

2.3电泳条件

仪器: 高效毛细管电泳仪HPCE512:配备214nm滤光片的紫外检测器;

毛细管总长度:61.1cm;

毛细管分离长度:48.8cm;

毛细管内径:50μm;

检测波长:214nm;

毛细管温度:25℃;

进样盘温度:25℃;

分离电压:28kV-–+);

进样压力及时间:0.5psi,20s;

分离时间:6min;

运行缓冲液60mmol/L硼砂+100mmol/L硼酸+0.5mmol/L CTAB

样品提取液将运行缓冲液稀释10倍即可

新毛细管在使用前分别用纯甲醇冲洗20min,1mol/L NaOH 冲洗20min,超纯水冲洗5min,运行缓冲液冲洗5min。每次进样前依次用纯甲醇冲洗2min,1mol/L NaOH 冲洗2min,超纯水冲洗2min,运行缓冲液冲洗2min,以保证迁移时间和峰面积的重现性。

3 结果与讨论

3.1实验结果

1校准曲线及检出限

配制利巴韦林浓度为1.5mg/L、5mg/L、10mg/L、20mg/L50mg/L的系列标准溶液,214nm条件下进样,外标法定量,质量浓度与校正峰面积具有良好的线性关系。实验得到的线性方程为y=0.0017x+0.0008,R20.9996,检出限为0.2mg/L。

2仪器精密度

为了验证仪器的稳定性,将利巴韦林浓度为5mg/L的标准溶液进样7次,考察仪器精密度,结果见表1。


表1 仪器精密度(n=7)


 

3方法精密度

为了验证该方法的可靠性,将某利巴韦林药物提取后连续进样7次,结果见表2。


表2 方法精密度(n=7)

4实际样品分析

选取2种利巴韦林药物样品,提取后稀释相应倍数上机分析,利巴韦林药物提取物的电泳图如图1所示。

  

1利巴韦林药物提取物的电泳图(下图为20mg/L利巴韦林标准溶液的电泳图,中图为利巴韦林颗粒提取物稀释100倍后的电泳图,上图为利巴韦林片提取物稀释1000倍后的电泳图)

3.2结论

使用高效毛细管电泳仪检测抗病毒药物中的利巴韦林,前处理简单,检出限达0.2mg/L,精密度高,定量快速准确。与超高效液相色谱-串联质谱法相比,经济快速,可作为抗病毒药物中利巴韦林检测的理想手段。

 

参考文献

 WS/T 686-2020消毒剂与抗抑菌剂中抗病毒药物检测方法与评价要求

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