西洋参中人参皂苷Rg1、Re、Rb1的测定高效液相色谱法

2020-06-19

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一、摘要

本文使用悟空K2025高效液相色谱仪测定西洋参中人参皂苷Rg1、Re、Rb1的含量。其连续进样7针的峰面积的重复性完全满足2020年版《中国药典》的要求。

二、背景

西洋参具有补气养阴，清热生津。用于气虛阴亏，虛热烦倦，咳喘痰血，内热消渴，口燥咽干。西洋参为市场上较为常见的名贵药材，其主要的活性成分为皂苷类，如人参皂苷Re、人参皂苷Rb1等。在2020年版《中国药典》中规定了利用高效液相色谱法测定西洋参中人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1的含量以控制药物的质量。

三、实验过程

1 范围

适用于西洋参中人参皂苷Rg1、Re、Rb1的测定。

2 原理

人参皂苷Rg1、Re、Rb1易溶于甲醇，在203nm处有紫外吸收，使用高效液相色谱法进行检测，外标法定量。

3 试剂与材料

3.1 水：符合GB/T6682的一级水；

3.2 乙腈：色谱纯；

3.3 磷酸：优级纯；

3.4 0.1%磷酸水溶液：吸取1mL磷酸用一级水定容至1L，过0.22μm滤膜。

4 仪器与设备

4.1 高效液相色谱仪：K2025 P2二元高压梯度输液泵、K2025 AS自动进样器、K2025 CO柱温箱、K2025 UVD紫外-可见光检测器；Wookinglab色谱工作站

5 测定步骤

5.1样品前处理

对照品溶液制备：取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rb1对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL各含人参皂苷Rg1 0.1mg、人参皂苷Re 0.4mg、人参皂苷Rb1 1mg的溶液，即得。

供试品溶液制备：取本品粉末（过三号筛）约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水饱和的正丁醇50mL，称定重量，置水浴中加热回流提取1.5小时，放冷，再称定重量，用水饱和正丁醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液25mL，置蒸发皿中，蒸干，残渣加50%甲醇适量使溶解，转移至10mL量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

5.2 色谱条件：

a）色谱柱：C18 4.6×250mm，5μm；

b）流动相：A：乙腈；B：0.1%磷酸水溶液；

c）柱温：40℃；

d）进样量：10μL；

e）流速：1mL/min；

f）波长：203nm；

h）梯度洗脱程序见表1：

表1 梯度洗脱程序

时间/min	A%（乙腈）	B%（0.1%磷酸水溶液）
0	19	81
25	20	80
60	40	60
90	55	45
100	60	40
110	19	81
120	19	81

6 色谱图及重复性结果

对照品参考色谱图如图1

图1. 对照品参考色谱图

对照品进样7针的色谱图叠加图如图2

图2. 进样7针对照品色谱图的叠加图

表2 进样7针对照品重复性计算结果

峰1 Rg1		对照品1	对照品2	对照品3	对照品4	对照品5	对照品6	对照品7	平均值	SD	RSD%
	保留时间	33.760	33.818	33.675	33.755	33.685	33.747	33.675	33.731	0.054	0.161
	峰面积	406.775	406.708	409.409	410.531	407.131	407.826	410.157	408.362	1.637	0.401
峰2 Re		对照品1	对照品2	对照品3	对照品4	对照品5	对照品6	对照品7	平均值	SD	RSD%
	保留时间	34.550	34.602	34.470	34.542	34.482	34.532	34.472	34.521	0.049	0.142
	峰面积	1203.446	1205.585	1212.382	1214.792	1204.29	1206.646	1213.277	1208.631	4.700	0.389
峰3 Rb1		对照品1	对照品2	对照品3	对照品4	对照品5	对照品6	对照品7	平均值	SD	RSD%
	保留时间	54.850	54.860	54.808	54.873	54.813	54.84	54.833	54.840	0.024	0.043
	峰面积	2855.097	2858.418	2876.438	2878.897	2856.686	2860.233	2877.542	2866.187	10.837	0.378

供试品参考色谱图如图3

图3 供试品参考色谱图

进样7针供试品色谱图叠加图如图4

图4 进样7针供试品色谱图叠加图

表3 进样7针供试品重复性计算结果

峰1 Rg1		供试品1	供试品2	供试品3	供试品4	供试品5	供试品6	供试品7	平均值	SD	RSD%
	保留时间	33.755	33.69	33.705	33.785	33.745	33.788	33.837	33.758	0.051	0.150
	峰面积	131.802	131.307	131.923	132.136	132.972	132.87	132.272	132.183	0.589	0.446
峰2 Re		供试品1	供试品2	供试品3	供试品4	供试品5	供试品6	供试品7	平均值	SD	RSD%
	保留时间	34.548	34.487	34.5	34.57	34.535	34.587	34.622	34.550	0.048	0.138
	峰面积	1909.479	1914.707	1910.289	1912.251	1915.361	1918.142	1917.844	1914.010	3.453	0.180
峰3 Rb1		供试品1	供试品2	供试品3	供试品4	供试品5	供试品6	供试品7	平均值	SD	RSD%
	保留时间	54.923	54.895	54.87	54.895	54.87	54.918	54.907	54.897	0.021	0.039
	峰面积	4592.244	4604.912	4600.139	4605.279	4614.771	4623.34	4625.138	4609.403	12.166	0.264

7 结论

采用悟空仪器 K2025高效液相色谱仪对西洋参中的人参皂苷Rb1、Rg1、Re进行测定，实验结果表明，在连续梯度洗脱条件下，连续进样7针对照品及供试品Rg1、Re、Rb1保留时间RSD均小于0.20%；连续进样7针对照品及供试品Rg1、Re、Rb1峰面积RSD均小于0.50%，满足药典小于2.0%的要求。因此，使用悟空仪器 K2025的高效液相色谱仪测定西洋参中的人参皂苷Rb1、Rg1、Re有良好的重复性。

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